3 結果與分析

3. 1 菌株生長(cháng)曲線(xiàn)結果

如圖 1 所示，微生物固態(tài)發(fā)酵生長(cháng)曲線(xiàn)整體呈增長(cháng)-平穩-下降趨勢。菌株生長(cháng)對數期主要集中在 72～96 h。隨著(zhù)培養時(shí)間延長(cháng)，培養基中營(yíng)養成分含量減少，不能滿(mǎn)足菌株生長(cháng)發(fā)育的需要，菌株數量不斷減少，生長(cháng)曲線(xiàn)逐漸降低。發(fā)酵菌株中混合菌，在 72 h 菌株數量達到峰值，生長(cháng)情況最好。干酪乳桿菌在 120～144 h 達到對數期，干酪乳桿菌較其他菌株生長(cháng)對數期時(shí)間延后。

3. 2 粗蛋白含量結果

蛋白質(zhì)是動(dòng)物新陳代謝、生長(cháng)發(fā)育等生理活動(dòng)必不可少的營(yíng)養物質(zhì)，是動(dòng)物重要的營(yíng)養源之一，對體組織、器官和細胞的形成、修補、增生以及酶類(lèi)和激素功能的實(shí)現都是不可或缺的，其作用是其他營(yíng)養物質(zhì)不可替代的。酪蛋白標準曲線(xiàn) Y=0. 102 3x−0. 000 2，R2= 0. 999 5。如圖 2 所示，青蒿葉渣發(fā)酵后積累粗蛋白含量整體呈上升趨勢，青蒿葉渣發(fā)酵后與對照組比較，酵母菌發(fā)酵青蒿葉渣積累粗蛋白含量提高了 71. 15%（P<0. 05），提高程度最高，這可能與酵母菌含有豐富的蛋白質(zhì)、維生素和氨基酸等有關(guān)；其次是植物乳桿菌 B7，發(fā)酵后其粗蛋白含量提高了 58. 59%（P<0. 05）；瑞士乳桿菌發(fā)酵后其粗蛋白含量提高了 55. 45%（P<0. 05）。綜上，釀酒酵母菌適合應用于發(fā)酵提高相關(guān)產(chǎn)品粗蛋白。 

3. 3 青蒿葉渣功效成分含量結果

雙氫青蒿酸和青蒿乙素標準品通過(guò) GC-MS檢測得到色譜圖和質(zhì)譜圖，通過(guò)對 2 種功效成分定量分析，比較發(fā)酵后雙氫青蒿酸和青蒿乙素功效成分含量變化。

由圖 3 可見(jiàn)，青蒿葉渣經(jīng)過(guò)固態(tài)發(fā)酵，雙氫青蒿酸和青蒿乙素含量顯著(zhù)提高，整體呈上升趨勢。數據顯示，青蒿葉渣經(jīng)地衣芽孢桿菌發(fā)酵后與對照組比較，雙氫青蒿酸和青蒿乙素含量分別提高了 111. 74%（P<0. 05）和 71. 15%（P<0. 05）；其次是瑞士乳桿菌，發(fā)酵后其雙氫青蒿酸含量提高了 101. 93%（P<0. 05）；青蒿葉渣經(jīng)丁酸梭 菌 發(fā)酵后，其青蒿乙素含量提高了82. 67%（P<0. 05）。

3. 4 混合菌發(fā)酵

根據上述單一菌種固態(tài)發(fā)酵青蒿葉渣后粗蛋白、雙氫青蒿酸、青蒿乙素含量變化結果，選擇酵母菌、植物乳桿菌及枯草芽孢桿菌組成混合菌，發(fā)酵青蒿葉渣。如圖 4、圖 5 所示，青蒿葉渣經(jīng)混合菌固態(tài)發(fā)酵后，粗蛋白含量提高了61. 73%（P<0. 05），雙氫青蒿酸含量提高了82. 76%（P<0. 05），青蒿乙素含量提高了69. 15%（P<0. 05）?；旌暇虘B(tài)發(fā)酵青蒿葉渣功效成分含量提升顯著(zhù)，為探索青蒿葉渣作為動(dòng)物飼料添加劑的開(kāi)發(fā)產(chǎn)提供理論指導。

3. 5 飼喂試驗結果分析

如圖 6 所示，青蒿葉渣混合菌發(fā)酵產(chǎn)物作為飼料添加劑飼喂羅曼灰雞群后，蛋殼的光澤度改善，亮度增加，顏色和蛋殼質(zhì)量改善不明顯（圖 6A），紅糞情況明顯好轉，糞便成型，變細膩，羅曼灰雞的腸毒過(guò)料效果明顯。

4 討論

中藥渣掩埋堆放不僅造成中藥資源浪費，增加相關(guān)制藥企業(yè)支出，開(kāi)發(fā)中藥渣綜合利用新技術(shù)，提升中藥渣利用率。本研究選取里氏木霉、地衣芽孢桿菌、黑曲霉菌、枯草芽孢桿菌、干酪乳桿菌、植物乳桿菌、瑞士乳桿菌、丁酸梭菌、植物乳桿菌 B7、酵母菌、畢赤酵母菌及復合菌株（釀酒酵母菌、植物乳桿菌、枯草芽孢桿菌）固態(tài)發(fā)酵青蒿葉渣，探索其作為動(dòng)物飼料添加劑的可能。粗蛋白含量是飼料添加劑的一個(gè)重要評價(jià)標準，本研究 結 果 顯 示 酵 母 菌 固 態(tài) 發(fā) 酵 粗 蛋 白 含 量 提 高71. 15%（P<0. 05），提 高 最 大 ，適 合 用 于 發(fā) 酵生產(chǎn)。

發(fā)酵青蒿渣產(chǎn)品的蛋雞飼喂實(shí)驗結果顯示蛋殼亮度增加，雞群紅糞情況明顯好轉，糞便變得細膩，過(guò)料殘渣明顯減少，推測與雙氫青蒿酸和青蒿乙素對雞腸道球蟲(chóng)有明顯抑制作用，且益生菌分泌大量抑菌物質(zhì)，改善禽畜腸道內環(huán)境有關(guān)。李姣清研究在雞的日料中按 1 g•kg-1體重添加中藥復方制劑到半天的飲水中，結果發(fā)現中藥復方制劑對小腸形態(tài)結構有積極影響，可以增加腸道菌群多樣性，有效地改善腸道健康和功能，促進(jìn)雛雞的生長(cháng)。周翠珍等用常山、青蒿、苦參、柴胡、地 榆（炭）、白 頭 翁 等 組 成 的 純 中 藥 散 劑 ，按 照0. 25%、0. 5%、l%濃度給不同試驗組雞混勻拌料飼喂，試驗結果表明，l%純中藥散劑組 0. 5% 純中藥散劑組的抗球蟲(chóng)指數在 160～180 之間，為中效， 2 個(gè)劑量均能很好的控制人工感染柔嫩艾美耳球蟲(chóng)病雞免于死亡，改善禽畜過(guò)料病癥，保護腸道健康。所以青蒿葉渣采用微生物固態(tài)發(fā)酵模式，粗蛋白含量提高，殘留功效成分得到充分釋放，未來(lái)可作為動(dòng)物養殖飼料添加劑。 

5 結論

本研究通過(guò)微生物固態(tài)發(fā)酵青蒿葉渣，發(fā)酵后粗蛋白、雙氫青蒿酸、青蒿乙素含量均較對照組有所提高。青蒿葉渣經(jīng)釀酒酵母菌發(fā)酵后產(chǎn)物中粗蛋白含量最高，經(jīng)地衣芽孢桿菌發(fā)酵后產(chǎn)物中雙氫青蒿酸、青蒿乙素含量最高?；旌暇虘B(tài)發(fā)酵青蒿葉渣使產(chǎn)物中功效成分含量得到較高提升，將其添加到動(dòng)物飼料中飼喂雞群，紅糞情況明顯好轉，尚不能明確益生菌和青蒿功效成分對雞腸道保健的作用機制。如將青蒿添加到動(dòng)物飼料目錄中，可使該研究結果為今后進(jìn)一步探索工廠(chǎng)化發(fā)酵生產(chǎn)青蒿動(dòng)物飼料添加劑提供參考依據。

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