一、方法選擇的依據
長(cháng)期以來(lái),測定粗纖維常用酸(H2SO4 )堿(NaOH)交替浸煮法。該法操作手續冗長(cháng),測定條件不易控制,而且試樣經(jīng)沸熱NaOH溶液處理時(shí),木質(zhì)素有不等比例的溶解,使粗纖維的測得值偏低,從而使“無(wú)氮浸出物”含量偏高。
范蘇士特的酸性洗滌劑法(ADF)操作較簡(jiǎn)便,是一個(gè)快速的方法。測得的“酸-洗滌劑纖維”較前法為高。酸-洗滌劑法對纖維素的回收率以及它的結果與樣品的消化率之間相關(guān)系數都高于前法。采用酸性洗滌劑法,必要時(shí)還可以接著(zhù)分離測定酸不溶性木質(zhì)素。此法現已得到美、英等國的公認。
二、方法原理
季按鹽[例如+六烷基三甲基溴化銨(Cetyltrimethly ammonium bromide,簡(jiǎn)稱(chēng)CTAB)],是一種表面活性劑,在硫酸溶液[c(H2SO4)=0.5mol·L-1]中能有效地使動(dòng)物飼料、植物樣品中蛋白質(zhì)、多糖、核酸等組分水解、濕潤、乳化、分散,而纖維素及木質(zhì)素則很少變化。酸一洗滌劑法就是利用這個(gè)原理.將試樣用CTAB的H2SO4溶液(酸-洗滌劑)煮沸lh,過(guò)濾,洗凈酸液后烘干,根據殘渣的質(zhì)量計算酸性洗滌劑纖維(%)。
本法適用于谷物及其加工品、飼料、牧草、果蔬等植物莖稈,葉、果實(shí)以及經(jīng)測定粗脂肪后的任何試樣中粗纖維的測定。
三、儀器及設備
回流裝置。250mL玻璃三角瓶上附橡皮塞及冷凝玻瑞管八號玻璃濾器((40mL~50mL ),或古氏坩堝;真空泵抽濾裝置。
四、試劑
(1)酸性洗滌劑溶液{p[CH3CH2)15(CH2)3N·Br]=20g·L-1,c(H2SO4)=0.50mol·L-1}:稱(chēng)取十六烷基三甲基溴化銨(化學(xué)純)20g加到1000 mL硫酸溶液[c(H2SO4)=0.50mol·L-1〕中,搖動(dòng),使之溶解;
(2)酸洗石棉。
五、操作步驟
稱(chēng)取通過(guò)1mm篩的風(fēng)干試樣1.000g或相當量的鮮樣,放入250 mL三角瓶中,在室溫下加入酸性洗滌劑溶液100 mL。加熱,使之在5min~10min內煮沸。剛開(kāi)始沸騰時(shí)計算時(shí)間,裝上冷凝管回流60min。注意調節加熱溫度,使整個(gè)回流過(guò)程始終維持微沸狀態(tài)。
取下三角瓶,轉動(dòng)內容物,用已知質(zhì)量(m1)的玻璃坩堝式濾器或古氏坩堝減壓抽濾。過(guò)濾時(shí),先用傾瀉法過(guò)濾,將酸性洗滌劑溶液濾干后,用玻棒將殘渣攪散,加入900C~100℃的熱水傾洗3次~4次,減壓抽濾,洗凈酸液后將殘渣轉移入濾器中,重復水洗,仔細沖洗濾器的內壁,至酸-洗滌劑洗盡為止。用丙酮同樣洗滌濾器兩3次,直到濾出液無(wú)色為止。抽干濾渣中的丙酮,放入1000C鼓風(fēng)式干燥箱中干燥3h,冷卻后稱(chēng)其質(zhì)量(m2)。
六、結果計算
粗纖維(酸性洗滌纖維)%=
式中;m2——粗纖維和空坩堝質(zhì)量,g;
m1——空坩堝質(zhì)量,g;
m ——烘干樣品質(zhì)量,g.
兩次平行測定結果允許差
樣品中酸性洗滌纖維% 允許差%
<5 0.5
5~25 1
>25 2
參考資料:土壤農業(yè)化學(xué)分析方法