2、胰蛋白酶響應面優(yōu)化設計

（1）響應面設計及結果

響應面試驗結果見(jiàn)表4，采用Des遠nExpert8.0.6軟件對表4中數據進(jìn)行方差、顯著(zhù)性分析，結果見(jiàn)表5。

以酶解時(shí)間、pH、溫度、加酶量為響應變量，α-淀粉酶活性抑制率為響應值，通過(guò)響應面回歸方程分析可知，藜麥多肽液具有α-淀粉酶活性抑制率的多元二次擬合回歸方程為：

Y=44.09+2.53A一1.87B+4.39C+4.47D+1.86AB+1.61AC+7.67AD+9.20BC+1.90BD一4.19CD一9.11A²—12.84B²—1.78C²—9.79D²。

19CD一9.11A2—12.8482—1.78C2—9.79D2。

由表5可知，模型的P＜0.0001，表示模型回歸差異極顯著(zhù)，失擬項P=0.8453＞0.05，不顯著(zhù)，說(shuō)明擬合程度良好，能真實(shí)反映實(shí)際情況，模型可靠；模型回歸決定系數R²=0.9728＞0.9，說(shuō)明α-淀粉酶活性抑制率結果與方程預測結果具有一致性，模型相關(guān)度好。試驗模型校正系數R_Adj²=0.9457，表明模型擬合程度較高。說(shuō)明有94.57％試驗結果值可以用此模型來(lái)解釋?zhuān)虼私Y果可靠，模型可以對α-淀粉酶活性抑制率值進(jìn)行分析和預測。由回歸方程式中一次項系數可知，各因素對α-淀粉酶活性抑制率作用大小順序為；加酶量(D)＞溫度(C)＞酶解時(shí)問(wèn)(A)＞pH(B)。

（2）響應面分析與條件優(yōu)化

響應面曲線(xiàn)分析，各因素問(wèn)等高線(xiàn)圖和交互作用見(jiàn)圖6。

由圖6可知，pH與時(shí)間、溫度與pH、加酶量與溫度交互作用的顯著(zhù)性與表5中交互項P值的分析結果一致。a，c，e均呈橢圓形，表明因素問(wèn)交互作用顯著(zhù)，等高線(xiàn)的形狀可以判斷交互作用的強弱，3組等高線(xiàn)圖中加酶量與溫度交互作用最好，等高線(xiàn)中的曲線(xiàn)圍繞著(zhù)響應面在中問(wèn)處形成頂點(diǎn)，即抑制率最大值。a，c，e響應面圖開(kāi)口都朝下，隨著(zhù)每個(gè)因素值的增加而響應值增大，在達到響應值最高點(diǎn)后，隨著(zhù)因素值的增大而響應值減小，響應面的頂點(diǎn)即為最大響應值。

經(jīng)DesignExpert8.0.6軟件分析得到優(yōu)化條件為：酶解時(shí)間2.22h、pH8.95、溫度60℃、加酶量0.53×10⁴U／g，在此條件下，曠淀粉酶活性抑制率的理論最大值為47.82％，采用這一結果并結合實(shí)際條件，將酶解條件改為：酶解時(shí)間2h、pH9.0、溫度60℃、加酶量0.5×10⁴U／g，得到的試驗結果為45.54％，與理論預測值基本一致，建立的模型可以較好地反映藜麥多肽液具有抑制α-淀粉酶活性的能力，同時(shí)多肽得率為63.54％。

三、結論

以藜麥蛋白為試驗材料，研究酶解后的多肽對α-淀粉酶活性的抑制率，篩選出最適用酶。在單因素酶解條件下，選擇酶解時(shí)間、pH、溫度、加酶量進(jìn)行Box-Behnken試驗設計，優(yōu)化結果顯示：加酶量和酶解溫度對α-淀粉酶活性的抑制作用比pH和酶解時(shí)間要強。試驗結果表明：制備藜麥多肽的最佳提取工藝為：酶解時(shí)問(wèn)2h、pH9、溫度60℃、加酶量0.5×10⁴U／g，在此條件下α-淀粉酶活性抑制率為45.54％。為了提高多肽液對α-淀粉酶的活性抑制作用，還需對酶解多肽液進(jìn)行進(jìn)一步的純化處理。

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