紅心火龍果屬仙人掌科三角柱屬，原產(chǎn)地于西班牙、南美洲和非洲地區，因其身心健康特點(diǎn)和營(yíng)養成分獲得重視而被普遍栽種?，F階段，目前市面上常用的火龍果品種關(guān)鍵有：肥肉紅心火龍果、紅肉火龍果和紫紅肉火龍果3種。在其中，紅肉火龍果果實(shí)中含有肥肉紅心火龍果所缺乏的球甘藍黑色素，還富含充足的不飽和脂肪、水溶食物纖維等。除開(kāi)有較高的營(yíng)養成分外，紅肉火龍果在抗氧化性層面對身體也是有一定的協(xié)助功效。

果子中有機物的構成與成分是危害果子口味質(zhì)量的主要要素。果子中出現很多類(lèi)型的有機物，殊不知大部分果子一般以1種有機物為主導，極少數以多種多樣為主導。依據關(guān)鍵有機物的類(lèi)型，能夠將果子分成阿拉伯糖型果子、檸檬酸鈉型果子和酒石酸型果子等。果子中的有機物新陳代謝是一個(gè)錯綜復雜的人體生理全過(guò)程，由有機物的生成和溶解一同決策。有研究表明，阿拉伯糖是紅心火龍果的關(guān)鍵有機物。阿拉伯糖脫氨酶(NAD-MDH)、硫酸銨烯醇式丙酮酸腺苷酸(PEPC)和蘋(píng)果酸酶(NADP-ME)是阿拉伯糖新陳代謝中重要的3個(gè)酶，前二者催化反應阿拉伯糖的生成，后面一種則參加阿拉伯糖的溶解，他們一同調整了紅心火龍果成長(cháng)發(fā)育歷程中阿拉伯糖的新陳代謝和累積，其成分是一個(gè)變化規律的全過(guò)程，可危害紅心火龍果的口味質(zhì)量。

現階段有關(guān)紅肉火龍果中阿拉伯糖的新陳代謝轉變還末見(jiàn)科學(xué)研究報導。本實(shí)驗探討了“玫瑰香”種類(lèi)和“大紅色一號”種類(lèi)紅心火龍果儲藏歷程中的質(zhì)量轉變和阿拉伯糖新陳代謝重要遺傳基因NADP-ME、PEPC和NAD-MDH的表述差別，為進(jìn)一步科學(xué)研究紅肉火龍果采后儲藏歷程中阿拉伯糖累積的調節體系和對口味特點(diǎn)產(chǎn)生的危害給予科學(xué)論證。

1 原材料與方式

1.1 原材料與實(shí)驗試劑

1.1.1 原材料

“玫瑰香”種類(lèi)紅心火龍果，采自浙江江山市秋實(shí)農業(yè)合作社；“大紅色一號”種類(lèi)紅心火龍果，采自浙江諸暨市雪鋒紅心火龍果產(chǎn)業(yè)基地，冷藏車(chē)帶回試驗室后放置10℃冷凍庫中急冷12h。

1.1.2 實(shí)驗試劑

磷酸二氫鉀、硫酸銨、福林-酚等(分析純級)，購自國藥控股化學(xué)藥品有限責任公司；色譜儀級工業(yè)甲醇、色譜儀級乙腈，購自英國迪馬科技有限公司；鹽酸、酒石酸、阿拉伯糖、乳酸菌、檸檬酸鈉、富馬酸及琥珀酸標準物質(zhì)，購于阿拉丁試劑(上海市)有限責任公司；異硫氰酸苯酯、三乙胺、分散碳水化合物混標，購于英國Sigma試劑公司：PEPC測定試劑盒。購于南京建成生物技術(shù)研究室。

1.2 儀器設備與機器設備

TAXTPlus型質(zhì)構儀，美國SMS企業(yè)：PAL-1型手執折射儀，日本ATAG0企業(yè)；877Titrinoplus全自動(dòng)電位滴定儀，瑞士萬(wàn)通股權有限責任公司；UV-9000紫外線(xiàn)-由此可見(jiàn)光度計，上海市元析儀器設備有限責任公司：Waters高效率液相色譜(型號規格e2695-2998裝有PDA探測器)，沃特世高新科技(上海市)有限責任公司；少量光度計，日本SHIMADZY企業(yè)；控溫增加PCR儀，英國賽默飛世爾科技有限公司：少量計算蛋白質(zhì)檢測儀，英國賽默飛世爾科技有限公司：The瑚oMR23i快速超低溫冷凍離心機。法國的喜德盛控股集團有限責任公司。

1.3 實(shí)驗方式

選擇無(wú)機械設備損害，果子的大小和質(zhì)量指標相對性一致的“玫瑰香”紅心火龍果和“大紅色一號”紅心火龍果。用2％氫氧化鈣泡浸消毒殺菌后當然晾曬，于25℃控溫塑造，每一組3次反復。各自在儲藏第0，1，2，3，4，5，6。7，8天按時(shí)抽樣，放置液態(tài)氮中快速凍存，混和后散裝至試品袋里，于-80℃儲存。用以事后質(zhì)量指標值測量。

1.3.1 強度的測量

參照黃子娟的方式。并稍加改動(dòng)。選用質(zhì)構儀測量紅心火龍果的外果皮強度和果實(shí)強度，應用直徑2mm攝像頭(P/2型)，選擇紅心火龍果果子無(wú)魚(yú)鱗的地球赤道位置開(kāi)展穿刺術(shù)測量，反復3次，取均值，企業(yè)為N。

1.3.2 可滴定管酸成分的測量

選用可滴定管酸全自動(dòng)電位滴定儀測量。果實(shí)勻漿后過(guò)慮，取滲瀝液1mL，用雙蒸水滴定劑至100mL。以0.05mol/LNa0H水溶液滴定管，紀錄滴定終點(diǎn)時(shí)常用堿溶液的容積，并測算可滴定管酸成分，反復3次。

1.3.3 可溶固體物質(zhì)成分的測

選用手執折射儀測量試品可溶固體物質(zhì)成分，反復3次。

1.3.4 維他命C成分的測量

參照吳媛媛等的方式 。稱(chēng)量1g紅心火龍果碾磨樣，添加5％TCA水溶液，攪拌后離心式。取上清液先后添加5％三氯乙酸、0.5％鄰菲羅琳-乙醇溶液、0.5％硫酸銨-乙醇溶液、0.03％三氯化鐵-乙醇溶液和1mL工業(yè)乙醇后于30℃水浴1h。用純凈水調零，以純凈水替代上清液為對照品。在光波長(cháng)534nm處測量OD值值，反復3次，企業(yè)為mg/100g。

1.3.5 總酚成分的測量

選用福林酚酶活性測定，參照范智義等的方式 ，并且做好適度改動(dòng)。稱(chēng)量紅心火龍果碾磨樣1.0g，添加5.OmL60％酒精萃取法2h，10000×g離心式15min，取上清液1mL至25mL具塞試管嬰兒中，添加3mL1.0mol/L福林酚試劑后混勻，靜放5min后添加6mL7.5％碳酸鉀，用純凈水滴定劑至25mL。室內溫度下到在黑暗中置放2h，以不用沒(méi)食子酸的試品為空缺，于光波長(cháng)760nm處測量其OD值值，反復3次，以沒(méi)食子酸成分為規范物測量總酚成分，企業(yè)為μg/g。

1.3.6 可溶性糖成分的測量

參照曹身心健康等的甲酸一鹽酸法，并且做好適度改動(dòng)。稱(chēng)量紅心火龍果碾磨樣1.0g，添加5。10mL純凈水后密封，于100℃水浴30min。制冷后過(guò)慮。滲瀝液移進(jìn)100mL容量瓶，回收利用沉渣，添加5～10mL純凈水于100℃水浴10min后制冷、過(guò)慮，合拼滲瀝液。取500μL試品液于試管嬰兒中。添加1.5mL純凈水和1.0mL9％甲酸，混勻，在5～20s內添加5mL硫酸，混勻，室內溫度下反映30min，以空缺為對照品，在光波長(cháng)485nm處測量其OD值值，反復3次。

1.3.7 有機物成分的測量

1) 色譜儀標準

C18正相反離子交換柱(3.9mm×300mm，5μm)；柱溫30℃；流動(dòng)性相為0.04mg/LKH2PO4-H3P04緩沖液：工業(yè)甲醇=95:5(容積比)；流動(dòng)速度0.8mL/min；氣相容積10μL；裝有PDA探測器，檢驗光波長(cháng)214nm；外標法定量分析。

2) 獲取方式

用高效液相色譜色譜分析，參照關(guān)秀杰等的方式 ，并且做好適度改動(dòng)。稱(chēng)量紅心火龍果碾磨樣5.0g于10mL容量瓶，添加一定量流動(dòng)性相，于75℃水浴45min，制冷至室內溫度，滴定劑。渦流2min，超聲波獲取15min，過(guò)慮分離出來(lái)蛋白等大分子物質(zhì)。取一定量滲瀝液，離心式10min完用0.45μm直徑的濾紙過(guò)慮上清液，預留。

1.3.8 NAD-MDH和NADP-ME酶活的測量

1)酶液獲取

參照Masashi等和Hirai等的方式 ，稍加改動(dòng)。取5g紅心火龍果碾磨樣，添加10mL經(jīng)急冷的碾磨緩沖溶液(包括10mmol/L異抗壞血酸、0.6mol/L綿白糖、0.2mol，LTris-HCl，pH8.2)，超低溫離心式后取上清液。用pH8.2的獲取緩沖溶液(包括10mm01/L異抗壞血酸、0.1％曲拉通X-100、0.2mol/LTris-HCl)滴定劑到50mL，攪拌后用獲取緩沖溶液滴定劑至100mL，酶液超低溫儲存預留。

2)酶活測量

NAD-MDH和NADP-ME酶促反應測量參照Hirai等的方式 。

1.3.9 PEPC酶活的測量

應用PEPC測定試劑盒測量試品中PEPC的酶活。

1.3.10 總RNA獲取及檢驗

應用天根含糖量花青素綠色植物總RNA獲取檢測試劑盒獲取紅心火龍果總RNA。取1μLRNA根據核苷酸蛋白質(zhì)檢測儀測量OD₂₆₀/OD₂₈₀比率檢測RNA純凈度，用一般瓊脂糖電泳電泳原理檢測RNA一致性。

1.3.11 RT-qPCR剖析

以總RNA為模板，選用諾維贊反轉錄檢測試劑盒，在冰浴標準下開(kāi)展第1鏈cDNA的生成。

阿拉伯糖新陳代謝有關(guān)遺傳基因引物設計(表1)根據Primer軟件獨立設計方案，檢測引物設計融解曲線(xiàn)圖單一(無(wú)非特異物質(zhì))后，可用以即時(shí)瑩光定性分析。