1.3.3.2質(zhì)譜分析測量

將酶解好的試品用MALDIＴOF/ＴOF質(zhì)譜儀器（英國AppliedBiosystems）對試品開(kāi)展測量，挑選適宜的儀器設備主要參數得到肽品質(zhì)指紋圖譜（PMF）。

1.4數據統計分析

全部數據信息最少為3次平行面實(shí)驗的均值。選用Origin9.0制圖，SPSS19.0開(kāi)展顯著(zhù)性檢驗，P＜0.01為極明顯，P＜0.01為極明顯，多重比較選用Duncan檢測。

2結果與剖析

2.1鯰魚(yú)肌原纖維蛋白質(zhì)溶解全過(guò)程中的2-DE圖普

如圖所示1所顯示，伴隨著(zhù)溶解歷程的開(kāi)展，0h時(shí)解決組蛋白點(diǎn)均較少，4℃-1h和25℃-0.5h時(shí)，蛋白質(zhì)點(diǎn)增加，與此同時(shí)低分子結構蛋白質(zhì)區發(fā)生蛋白質(zhì)點(diǎn)，說(shuō)明肌原游離脂肪酸被分解成小分子水活性多肽或蛋白。接著(zhù)，在4℃-2h和25℃-1h時(shí)，蛋白質(zhì)點(diǎn)越來(lái)越模糊不清，并產(chǎn)生托尾等對焦不充分的狀況。這可能是因為溶解全過(guò)程中蛋白二、三級構造產(chǎn)生變化，發(fā)生蛋白集聚和碳水化合物改性材料而致。

運用PDQuest手機軟件對4℃解決0，1，2h及25℃解決0，0.5，1h試品的2-DE圖普開(kāi)展可重復性和配對率的檢驗，對2-DE圖普蛋白質(zhì)點(diǎn)表述差別開(kāi)展相對比較剖析。差別蛋白質(zhì)點(diǎn)測試標準為：若某一個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在不一樣組中間的相對豐度的比率高于2，且t-testP＜0.05，即覺(jué)得該點(diǎn)為差別蛋白質(zhì)點(diǎn)。歷經(jīng)剖析獲得，4℃組和25℃組各自存有4五個(gè)、30個(gè)差別蛋白點(diǎn)，如圖4所顯示。差別蛋白質(zhì)點(diǎn)的部分擴大圖如圖2及圖3所顯示。

2.2差別蛋白質(zhì)點(diǎn)質(zhì)譜分析評定及剖析

在對如圖4所顯示的累計7五個(gè)差別蛋白點(diǎn)割膠采點(diǎn)的環(huán)節中，刪掉掉4和25℃反復的點(diǎn)，及其割膠不成功的點(diǎn)，共得到單獨可開(kāi)展質(zhì)譜分析評定的蛋白點(diǎn)24個(gè)。在其中4℃組中國共產(chǎn)黨有14個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)，分別是點(diǎn)3504，0510，6406，3413，1005，1105，1410，0014，1012，0007，6512，5506，0116，6407；25℃組中國共產(chǎn)黨有10個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)，分別是2402，2304，5302，5104，2204，4108，0214，5503，5504，2203。對割膠取得成功的24個(gè)蛋白點(diǎn)開(kāi)展膠內酶切后質(zhì)譜分析評定，獲得24個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)的肽指紋圖譜。

2.3差別蛋白的作用歸類(lèi)

2.3.1差別蛋白的細胞組成歸類(lèi)

表5列舉的Level9等級的差別蛋白的細胞組成歸類(lèi)，數據顯示，蛋白關(guān)鍵以框架構造一部分（cytoskeletalpart）為主導。收攏化學(xué)纖維一部分（contractilefiberpart）及肌原纖維（myofibril）分別包括一個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)，為點(diǎn)3504；正中間絲框架（intermediatefilamentcytoskeleton）包括兩個(gè)蛋白，各自為點(diǎn)5504及6407；肌動(dòng)蛋白框架（actincytoskeleton）包括4個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)，各自為3504，5503，5506，6512；框架構造一部分（cytoskeletalpart）包括6個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)，各自為3504，5504，6407，5503，5506及6512。說(shuō)明在溶解全過(guò)程中，主要是肌原纖維蛋白質(zhì)的框架構造造成毀壞。Ayala等發(fā)覺(jué)鯛魚(yú)在0℃儲藏期內肌原纖維蛋白質(zhì)溶解速率特別快，在其中主要是體細胞骨架蛋白被溶解。