3．1 安全系數評定

大家都知道，水產(chǎn)品養殖中運用的微生物務(wù)必 是 安 全 的，對魚(yú)類(lèi)、蝦類(lèi)不可以有高致病。然 而，從 92 種小動(dòng)物用益生菌粉商品中分離出來(lái)出 123 個(gè)益生菌粉菌種，在其中 45 個(gè)菌種對抗菌素耐藥性，33．7%的益生菌粉商品被肺部感染克雷伯菌等嚴重危害性命的病原菌環(huán)境污染，并且還發(fā)覺(jué)了炭疽毒素呈陽(yáng)性的蠟樣芽孢鏈球菌( Bacillus cereus) 菌種，這對海產(chǎn)小動(dòng)物及人們的身心健康造成極大威協(xié)。由此可見(jiàn)，挑選用以水產(chǎn)品養殖的益生 菌 菌 種，開(kāi)展安全評定為最重要一環(huán)。好氧水解酸化池備選菌苗不可以帶有一切質(zhì)粒編號的耐藥性遺傳基因或基因簇，不造成溶血癥圈，不帶有發(fā)病遺傳基因，不轉化成毒副作用新陳代謝物質(zhì)，且必須融合身體的亞急性、漫性毒副作用實(shí)驗開(kāi)展認證。

 3．2 菌種鑒定

好氧水解酸化池菌種鑒定方式同基本微生物評定方式相近，包含基本組織學(xué)觀(guān)查、生理學(xué)生物化學(xué)剖析、16S rＲNA 轉錄組測序和全高通量測序等。歷經(jīng)菌種鑒定，可得知菌種的種、屬等信息內容，這對進(jìn)一步科學(xué)研究菌苗的功能及具體運用帶來(lái)了主要參照。實(shí)際來(lái)講，以飼料添加物方式喂養的菌苗需合乎各個(gè)國家要求 的 菌 種 文件目錄，如英國食物與藥品管理處( FDA) 和英國精飼料操縱高官研究會(huì )( AAFCO) 發(fā)布的可立即喂養微生物名冊( 46 種) 、歐盟國家準予喂養的菌苗文件目錄( 72 種) 、在我國《飼料添加劑品種目錄》容許加上的微生物文件目錄( 35 種) ; 而改進(jìn)水質(zhì)自然環(huán)境的菌苗現階段暫未有明文規定，但必須合乎以前所提起的穩定性規定。 

3．3 耐受力評定

益生菌粉可以起到功效的主要因素之一為承受所運用的自然環(huán)境，而且可以在效用結構域移栽生長(cháng)發(fā)育，保持較高 的 活 菌 水 平，而 后 才 能 發(fā) 揮 功 效( 圖 2) 。有別于陸生動(dòng)物，益生菌作用水產(chǎn)品生物的效用結構域除開(kāi)小動(dòng)物腸胃外，也有水環(huán)境治理。因而，挑選的備選好氧水解酸化池菌種必須承受所運用的外自然環(huán)境，包含溫度、海水鹽度和 pH 等，喂養的益生菌粉還需歷經(jīng)胃液、膽鹽等的耐受力點(diǎn)評］。一般而言，可以不錯達到這一規定的便是采用水塘或水產(chǎn)品小動(dòng)物胃腸道的原住民有益菌，在科學(xué)研究南美洲小紅點(diǎn)鮭( Salveli- nus fontinalis) 時(shí)發(fā)覺(jué)，同外源性益生菌粉對比，當地的益生菌粉不容易影響?hù)~(yú)肌膚粘液有益菌，是調整魚(yú)種微生物菌種生態(tài)系統更強的挑選; 也發(fā)覺(jué)，來(lái)源于草蝦腸胃的乳桿菌可以盡快融入小動(dòng)物腸胃，并且能抑制病源弧菌的發(fā)育繁育; 研究發(fā)現，當地菌種越南地區芽胞鏈球菌( Bacillus vietnamensis ) VCM5、Bacillus vietnamensis VCM8和支氣管炎戈登菌(Gordoniabronchialis) VCM12 可明顯減少對蝦養殖污水中硝酸鹽成分，表明出不錯的適應能力。除此之外，一些必須在精飼料制作過(guò)程中增加的反水質(zhì)穩定劑中藥制劑，還需考慮到規?；a(chǎn)飼料生產(chǎn)制造的高溫、髙壓耐受力，在這樣的情形下，運用芽胞胞子很有可能更加適合。 

4 菌苗的復篩

好氧光合細菌的復篩包含: 運用可選擇性培養液( selective culture medium ) 測算菌苗脫氮高效率、分辨脫氮種類(lèi)及其依靠生物學(xué)和組學(xué)方式科學(xué)研究脫氮體制等流程。 

4．1 脫氮高效率科學(xué)研究

在好氧光合細菌脫氮高效率的分析中可選擇性培養液的秘方同飼養水質(zhì)的有機化學(xué)構成存有差別，如表 1 所顯示，可選擇性培養液常見(jiàn)氮源為 NH4Cl、 NaNO3 及 NaNO2 等，常見(jiàn)的氮源為琥珀酸鈉、三聚磷酸鈉、葡萄糖水、綿白糖和凡士林等。殊不知，在水產(chǎn)品養殖水質(zhì)中常會(huì )為有機化學(xué)氮源欠缺，并且氮源變成營(yíng)養豐富的有機化學(xué)氮源。挑選培養液的富碳特點(diǎn)在具體的種植條件中非常少存有，水塘飼養自然環(huán)境多見(jiàn)低碳環(huán)保高氮，有別于工業(yè)生產(chǎn)廢水能夠 附加給予很多便宜有機化學(xué)氮源，飼養中很多有機化學(xué)氮源的使用也許會(huì )導致水產(chǎn)品小動(dòng)物氧氣不足風(fēng)險性及微生物滋長(cháng)等現象發(fā)生?；?于 此， 直 接 配 制 0． 05 g /L 的 NaNO2 水溶液，并在這其中僅填補 1 g /L 破碎的魚(yú)料及排泄物以仿真模擬水塘中累積的有機化學(xué)化學(xué)物質(zhì)，為此光合細菌水塘仿真模擬培養液( pond-simulating denitri- fication screening medium，PSDSM) 開(kāi)展菌苗挑選，得到了脫氮高效率理想化的好氧水解酸化池菌種 Bacillus subtilis M 7-1，與此同時(shí)，街邊運用實(shí)驗確認，該菌種對飼養水塘中的無(wú)機物氮也具備較高的溶解率。在有機化學(xué)氮( 蛋白胨、尿素溶液) 存有的情形下，科學(xué)研究 反 硝 化 細 菌 海 洋 著(zhù) 色 菌 ( Marichromatium gracile) YL28 脫氮特性，發(fā)覺(jué)存有有機化學(xué)氮源且加上藻類(lèi)低聚糖后，YL28 對無(wú)機物氮的清除工作能力明顯提高。由此可見(jiàn)，在光合細菌的挑選環(huán)節中，培養液中氮源、氮源的選用及合適的泥齡關(guān)聯(lián)著(zhù)篩得菌種的脫氮特性，研究發(fā)現，大部分好氧光合細菌的較佳泥齡在 8 ～ 10，殊不知，飼養水塘中一般泥齡在6 ～ 8，因而在挑選培養液配置需考慮到這一差別，或在使用中填補緩凝氮源以保證菌苗的脫氮作用。

溫度是水解酸化池全過(guò)程的主要主要參數之一，已經(jīng)有科學(xué)研究表明，好氧光合細菌脫氮的適合溫度范圍為25 ～ 37 ℃。因而，在菌苗挑選的環(huán)節中塑造溫度可設置為 28 ～ 30 ℃ ( 表 1) ，但考慮到冷水魚(yú)養殖及秋春時(shí)節水質(zhì)脫氮的必須 ，嗜 冷 ( 10 ～ 15 ℃ ) 好氧光合細菌的挑選也至關(guān)重要。研 究 發(fā) 現，好氧反水質(zhì)穩定劑中國臺灣假單胞菌( Pseudomonas taiwanensis) 在 15 ℃ 下對磷酸鹽的污泥負荷為 100%，具有超低溫脫氮工作能力。殊不知，伴隨著(zhù)氣溫的 降 低，菌苗的水解酸化池高效率也會(huì )隨著(zhù)減少;研究表明，在 10 ℃ 標準下，好氧反水質(zhì)穩定劑孟氏假單胞菌( Pseudomonas mandelii) 同硝化反應和硝化作用有關(guān)的基因的表達產(chǎn)生落后和延遲時(shí)間。不難看出，塑造溫度的制定必須整體考慮到菌苗適宜標準及所運用的自然環(huán)境這 2 層面要素。

海水鹽度也危害著(zhù)好氧光合細菌的脫氮高效率。研究表明，海水養殖的含鹽量( 20‰ ～ 35‰) 已能抑制普遍病菌的輔因子并可產(chǎn)生溶菌功效。在水解酸化池層面，研究表明，在高含鹽量下，水解酸化池全過(guò)程的作用遺傳基因 nirK 和 nosZ 的表述進(jìn)化速率大幅度降低，抑止了病菌的水解酸化池活力。而與此同時(shí)，抗鹽好氧光合細菌也已經(jīng)有科學(xué)研究報導，從鹽枯草芽孢菌屬( Halobacillus) 、海源菌屬( Idiomarina) 、現大洋芽胞桿菌屬( Oceanobacillus) 和枝芽胞菌屬( Virgibacillus) 等屬種中分劉海篩到水解酸化池嗜鹽菌;從青島市膠州灣海面堆積物中分離出來(lái)出 1 株水解酸化池深海嗜鹽菌弧菌; 分離出來(lái)挑選的 Bacillus sp．可以在 16 g /L 的 NaCl 中開(kāi)展好氧硝化作用，這種分析對挑選海水養殖中運用的抗鹽好氧光合細菌給予根據。