灰樹(shù)花（Grifolafrondosa）一種珍貴的藥服用細菌，以子囊孢子或菌絲做為服用一部分，具備各種活力作用，如：抗氧化性、降血脂、降低血脂、抗癌、消除重金屬超標，而且帶有比較充足的生物活性化學(xué)物質(zhì)，如，灰樹(shù)花含糖量、花青素、谷甾醇類(lèi)、萜類(lèi)等活力成份。傳統式灰樹(shù)花固體塑造主要是運用木渣、麥草及其糧食作物副產(chǎn)物做為生長(cháng)發(fā)育栽培基質(zhì)，灰樹(shù)花采摘后，菌糠則被丟掉，導致較大的自然資源消耗及空氣污染。

開(kāi)發(fā)設計一種新式的灰樹(shù)花生長(cháng)發(fā)育栽培基質(zhì)，并徹底使用其發(fā)醇栽培基質(zhì)具備很高的科研使用價(jià)值。根據早期的研究將已提升的苦蕎麥、薏米仁等各種各樣栽培基質(zhì)的百分比做為灰樹(shù)花發(fā)醇栽培基質(zhì)開(kāi)展試驗?？嗍w麥做為西部地區一種食藥同源谷類(lèi)含有黃酮類(lèi)化合物，其蘆丁成分極高，薏米仁復含薏米仁酯、薏米仁素和充實(shí)的木薯淀粉化學(xué)物質(zhì)，二者能夠 做為灰樹(shù)花發(fā)醇栽培基質(zhì)，為灰樹(shù)花的成長(cháng)給予碳氮源。

天麻（Rhizomagastrodiae）一種名貴中藥，復含天麻素（p-hydroxymethylphenyl-β-D-glucopyranoside，GA）、對甲基苯甲醇（p-hydroxybenzylalcohol，HA）、對甲基苯甲醛（p-hydroxylbenzaldehyde，HBA）、巴利森苷，具備很高的藥理學(xué)作用。研究組早期實(shí)驗證實(shí)了加上一定百分比的天麻提取液參加灰樹(shù)花液體深層次發(fā)醇可以明顯地推動(dòng)灰樹(shù)花胞外含糖量的代謝及土壤含水量的提高及其溶解運用天麻成份開(kāi)展生物氧化。將中藥材天麻以不一樣比率的增加量參加灰樹(shù)花的固態(tài)發(fā)酵，進(jìn)一步充實(shí)和擴展中藥材資源與食用菌菌種共發(fā)醇及其彼此之間互相影響、生物氧化的科研市場(chǎng)前景及其中藥材菌質(zhì)商品的食品藥品使用價(jià)值。

1原材料與方式

1.1原材料與實(shí)驗試劑

灰樹(shù)花（Grifolafrondosa，菌苗序號：5.404）；天麻，貴州大方；苦蕎麥，貴州威寧；薏米仁，貴州興仁；天麻素標準品、對甲基苯甲醇標準品、對甲基苯甲醛標準品、巴利森苷標準品、蘆丁標準品、異槲皮苷標準品；沒(méi)有水硝酸鋁、亞硝酸鈉；其他實(shí)驗試劑均為市面上分析純

斜坡培養液為土豆葡萄糖水瓊脂粉（potatodextroseagar，PDA）培養液

1.2儀器設備與機器設備

BXM-30R型立柱式滅菌鍋；SW-CJ-1D型超凈工作臺；TGL-20M型臺式一體機快速冷凍離心機；CTFD-12S型真空泵冷凍式干燥機；恒溫培養箱；Agilent1100型高效率液相色譜及探測器、Agilent5TC-C18型離子交換柱

1.3實(shí)驗方法

1.3.1灰樹(shù)花固態(tài)發(fā)酵培養液配置步驟平面圖

1.3.2灰樹(shù)花菌苗塑造方式

1.3.2.1斜坡種籽塑造

從母種試管嬰兒中挑菌黃豆粒尺寸真菌塊注射于PDA細胞培養皿中間，25℃控溫塑造，至真菌爬滿(mǎn)全部斜坡，轉置4℃儲存。

1.3.2.2發(fā)醇塑造

培養液成份構成：苦蕎粉：4.5g；苦蕎麥皮：1.5g；薏米仁：1.5g；麥麩：0.4g；葡萄糖水：0.1g；

天麻粉：天麻烘干處理，超微粉碎機粉碎成天麻粉，過(guò)60目篩。各自依照培養液質(zhì)量濃度的0、10%、20%、30%、40%、50%添加到發(fā)醇培養液中參加固態(tài)發(fā)酵。

將以上原材料攪拌放水，放置滅菌鍋中殺菌（121℃、30min），培養液減少到室內溫度，連接灰樹(shù)花菌苗于培養液中，放進(jìn)恒溫恒濕設備恒溫箱中開(kāi)展生長(cháng)發(fā)育發(fā)醇12d（25℃）

1.3.3發(fā)醇栽培基質(zhì)的解決

發(fā)醇栽培基質(zhì)在恒溫恒濕設備恒溫箱中塑造12d后，將其開(kāi)展真空泵低溫干燥，干躁過(guò)后的發(fā)醇物超微粉并過(guò)80目篩，搜集粉末狀，放置-20℃標準下儲存，做為試驗原材料。

1.四分析方式

1.4.1黃酮類(lèi)物質(zhì)成分的測量

精準稱(chēng)量0.4g菌粉，添加20mL50%的酒精中，常溫下晃動(dòng)獲取1h，8000r/min離心式10min，取上清液，做為被測試品水溶液。選用NaNO2、Al（NO3）3著(zhù)色法精確測量，黃酮類(lèi)物質(zhì)成分以蘆丁劑量表明。

1.4.2天麻素、對甲基苯甲醇、對甲基苯甲醛、巴利森苷成分的測量

1.4.2.1色譜儀標準

離子交換柱：Agilent5TC-C18型離子交換柱（250mm×4.6mm，5µm）；過(guò)柱程序流程：0~35min（0%~30%B），35~40min（30%~100%B），40~45min（100%~3%B）；流動(dòng)性相：0.1%的硫酸銨水（D）、乙腈（B）；流動(dòng)速度：1mL/min；檢驗光波長(cháng)：221nm；柱溫：30℃

1.4.2.2試品溶液的配制

精準稱(chēng)量0.5g發(fā)醇粉末狀，添加10mL75%酒精，常溫下萃取法12h，8000r/min離心式10min，取上清液，做為被測試品水溶液，依照以上高效液相色譜色譜法（highperformanceliquidchromatography，HPLC）標準開(kāi)展天麻素、對甲基苯甲醇、對甲基苯甲醛、巴利森苷成分的測量，將各種各樣化學(xué)物質(zhì)的峰總面積帶入標曲，獲得各種各樣化學(xué)物質(zhì)的成分。

1.4.3蘆丁、異槲皮苷成分的測量

1.4.3.1色譜儀標準

流動(dòng)性相：0.02%的硫酸銨水、乙腈；流動(dòng)速度：1mL/min；檢驗光波長(cháng)：360nm；柱溫：30℃；等度過(guò)柱：V（乙腈）∶V（0.02%硫酸銨水）=20∶80

1.4.3.2試品溶液的配制

精準稱(chēng)量0.5g發(fā)醇粉末狀，添加10mL工業(yè)甲醇，常溫下萃取法12h，8000r/min離心式10min，取上清液，做為被測試品水溶液，依照以上HPLC標準開(kāi)展蘆丁、異槲皮苷成分的測量，將各種各樣化學(xué)物質(zhì)的峰總面積各自帶入標曲，獲得各種各樣化學(xué)物質(zhì)的成分。

1.5數據處理方法與剖析

全部的信息應用Origin10手機軟件繪圖，應用SPSS19.0手機軟件開(kāi)展數據統計分析。試驗數據信息以均值±相對標準偏差（m±SD）表明（n=3），應用單要素方差分析（ANOVA）和匹配t-檢測開(kāi)展顯著(zhù)性分析，P<0.05表明數據信息具備顯著(zhù)性差異。

2結果與剖析

2.1灰樹(shù)花固態(tài)發(fā)酵不一樣時(shí)間形狀及表觀(guān)構造的轉變

圖1為灰樹(shù)花在未加上天麻培養液上生長(cháng)發(fā)育轉變。在生長(cháng)發(fā)育7d時(shí)，灰樹(shù)花菌絲基本上布滿(mǎn)培養液，且真菌色調潔白，聯(lián)接高密度，表明灰樹(shù)花可以在栽培基質(zhì)上開(kāi)展常規的生長(cháng)發(fā)育，此類(lèi)培養液未對灰樹(shù)花的生長(cháng)發(fā)育造成抑制效果。

圖2為發(fā)醇組和未發(fā)醇組到不一樣日數時(shí)菌質(zhì)的表觀(guān)形狀圖。由圖2得知，在發(fā)醇組，伴隨著(zhù)灰樹(shù)花發(fā)酵時(shí)間的增加，栽培基質(zhì)構造造成很多微小的孔隙度，在發(fā)醇終點(diǎn)站時(shí)，栽培基質(zhì)從外到內均發(fā)生了很大的孔隙度，構造幾近溶散，對比于發(fā)醇組，未發(fā)醇組栽培基質(zhì)在0~12d的表觀(guān)構造形狀均未出現突出的轉變，構造均比較詳細高密度。

比照二者栽培基質(zhì)的表觀(guān)構造，表明經(jīng)灰樹(shù)花發(fā)醇，對栽培基質(zhì)構造發(fā)生了明顯的溶散功效，根據對栽培基質(zhì)構造的毀壞，促使栽培基質(zhì)的營(yíng)養元素更非常容易進(jìn)行析出，提升了菌絲與栽培基質(zhì)的觸碰總面積，有益于菌絲能夠更好地消化吸收運用營(yíng)養元素給予自己的成長(cháng)新陳代謝。