2.4病菌16SrRNA分子結構評定

16S rRNA PCR物質(zhì)電泳原理結果(圖4)說(shuō)明,從病菌 菌種的DNA模版中增加出尺寸約為1400 bp上下的片 段,合乎預期成果,系列號為MN736843,將基因序列根據NCBI開(kāi)展同宗核對剖析,數據顯示與該編碼序列同 源性能比最大的菌種均是豚鼠氣單胞菌，將編碼序列與已經(jīng)知道 編碼序列搭建系統發(fā)育樹(shù)(圖5),能夠 看得出,該菌種與豚鼠氣單胞菌(A. caviae)聚為一個(gè)支系,融合生化實(shí)驗和革 蘭氏上色等結果,可明確該分離出來(lái)菌種為豚鼠氣單胞菌。

2.5人力感柒

歷經(jīng)人力感柒的羅氏沼蝦發(fā)生與當然海域生病蝦 類(lèi)似的病癥,感柒羅氏沼蝦發(fā)生鰓絲腫脹,鰓絲表層出 現黑色斑等病癥(圖6),感柒組到7日內所有身亡，而對 照組沒(méi)有發(fā)現異常。從人力感柒瀕臨死亡的羅氏沼蝦 肝肝脹機構內再度開(kāi)展病菌分離純化，將分離出來(lái)菌種再 次開(kāi)展生理學(xué)生化實(shí)驗及其分子結構學(xué)評定等,獲得與原分 離菌種同樣的研究結果,證實(shí)該分離出來(lái)菌種為羅氏沼蝦病原菌-豚鼠氣單胞菌(A.caviae).

3探討

豚鼠氣單胞菌(A.caviae)歸屬于氣單胞菌科.氣單 胞菌屬，是威協(xié)我國水產(chǎn)品養殖小動(dòng)物身體健康的首要病原菌之一,可以造成 日本鰻鱺(Anguillajaponica).胡子鯰(Clarias fuscus).中華絨螯蟹(Eriocheir sinensis). 我國 草蝦(Penaeus chinensis). 南方地區鲇(Silurus meriordinalis Chen)、中華鱉(Triongxsinensis)等多種多樣水產(chǎn)品小動(dòng)物感柒。此次科學(xué)研究從生病的羅氏沼蝦身體分離出來(lái)出發(fā)病 菌，井將獲得的優(yōu)點(diǎn)菌種根據病菌形狀觀(guān)查.革蘭氏陽(yáng)性菌染 色、溶血癥實(shí)驗及其生理學(xué)生物化學(xué)剖析可判斷該分離出來(lái)菌 株為豚鼠氣單胞菌(A. caniae).其16S rRNA基因序列 搭建進(jìn)化樹(shù),數據顯示該分離出來(lái)菌種與豚鼠氣單胞菌聚 為一族,綜合性全部試驗結論可明確該分離出來(lái)菌種為豚鼠 氣單胞菌。應用該分離出來(lái)菌種對身心健康羅氏沼蝦開(kāi)展人力 感柒.感柒后的羅氏沼蝦主要表現出與當然福泉標準下患 病蝦類(lèi)似的病癥,并對感柒后的羅氏沼蝦再度開(kāi)展細 菌分高提純.獲得與豚鼠氣單胞菌類(lèi)似的菌種,進(jìn)一一步: 證實(shí)了該病菌在羅氏沼蝦身體的高致病,與此同時(shí)也對豚 鼠氣單胞菌的病源科學(xué)研究材料完成了一定的填補。

對分離出來(lái)菌種的身理生物化學(xué)特點(diǎn)開(kāi)展評定,該病菌 對抗霉素、阿拉伯糖、葡萄糖水產(chǎn)酸、蛋白胨水.精氨酸水 解酶、果膠.苯丙氨酸為呈陽(yáng)性:氯化氫.丙二酸鹽.賴(lài)氨 酸掉發(fā)酶。鳥(niǎo)氨酸脫羧酶。枸緣磷酸鹽.V-P .葡萄糖酸鹽 為呈陰性,豚鼠氣單胞菌的身理生物化學(xué)特點(diǎn)存有菌種差別 性，本科學(xué)研究分高的豚鼠氣單胞菌對枸櫞酸鹽和蛋白胨 水的評定結論與方式氣單胞菌反過(guò)來(lái),發(fā)生以上差別的 緣故可能是因為飼養自然環(huán)境、氣候條件.所在位置.宿主 體不一樣引起的?，F階段.,在海產(chǎn)小動(dòng)物中廣泛應用抗菌藥物 物對病癥開(kāi)展預防，此次分析的藥敏試驗試驗結果顯示,該 分離出來(lái)菌種對頭孢曲松鈉.氣菌素、氟苯尼考四環(huán)素、多西 環(huán)素s種藥品高寬比比較敏感,對卡那霉素1種藥品輕中度敏 感.對環(huán)丙沙星。環(huán)丙沙星、羅紅霉素.羅紅霉素新生兒霉 素.氨芐青霉素.復方新諾明和利福平8種藥品耐藥性。此次 科學(xué)研究結果與已報導的其它種類(lèi)分高于的脈鼠氣單胞菌 的藥品敏感度存有一-定差別1,這說(shuō)明豚鼠氣單胞菌 對藥品敏感度存有一-定的差別,這也許和不一樣的地域。 不一樣飼養條件中藥品類(lèi)型及其藥品應用水平不一樣有關(guān)于病菌的評定方式有很多,比如環(huán)受體等溫過(guò)程擴 增技術(shù)性.單抗和間接性ELISA法等.16SrRNA在 病菌性染色體的基因中普遍現象,含高寬比傳統區城且 分子大小自始至終。根據I6SrRNA基因序列剖析具備簡(jiǎn) 易、高效率等優(yōu)勢，早已變成病菌評定及其親緣關(guān)系分辨 的一一種合理的專(zhuān)用工具,可是由于I6SrRNA很有可能存有一一些 不清楚的結構域且遺傳基因數量比較有限,因此給編碼序列的剖析帶 來(lái)不方便，此次分析對分離出來(lái)病菌的16SrRNA遺傳基因以及系 統進(jìn)化樹(shù)開(kāi)展剖析,并與生理學(xué)生物化學(xué)特點(diǎn)和革蘭氏染色 等方式緊密結合,從而判定該分離出來(lái)菌種為脈鼠氣單胞菌， 提升了病菌評定結論的準確度和真實(shí)度。

現階段，已評定的氣單胞菌屬關(guān)鍵分離出來(lái)自人與不一樣 的小動(dòng)物宿主:從生病水生物及其人感柒的創(chuàng )口中分離出來(lái)-有的還能在食品中分離純化獲得PPABLOS等 從拉肚子患者.飲用水及其食品類(lèi)分離出來(lái)的氣單型菌開(kāi)展評定﹐ 結果顯示,人源氣單胞菌和飲水資源氣單型菌比較貼近， 表明氣單型菌能夠 根據水資源散播到人們,進(jìn)而造成人 癸造成病癥P樊海公平*從產(chǎn)生白血病的中國對蝦 分離純化出豚鼠氣單胞菌和嗜水汽單胞菌,可是有關(guān) 從羅氏沼蝦中分開(kāi)到豚鼠氣單胞菌及其以豚鼠氣單胞 菌感柒為主導的羅氏沼蝦病癥的消息較少,羅氏沼蝦豚 鼠氣單胞菌是不是可以造成 人與別的水生物病發(fā)﹐它 與人玄氣單胞菌有沒(méi)有親緣關(guān)系,及其其發(fā)病原理均有 特進(jìn)一步科學(xué)研究。因而,中后期還必須進(jìn)一步開(kāi)展此病璧 菌的臨床流行病學(xué)調研，掌握其患病的規律性,并確定其傷害 的目標及其科學(xué)研究其致胸原理等,將更有助于對該發(fā)病 菌造成的羅氏沼蝦病癥實(shí)現合理的防治,推動(dòng)羅氏沼 蝦產(chǎn)業(yè)鏈的身心健康發(fā)展趨勢-

抗菌素等藥品是維持養魚(yú)業(yè)小動(dòng)物身心健康生產(chǎn)制造以 及病 例治的有效途徑。但是因為當今水產(chǎn)市場(chǎng)抗生素 素類(lèi)型過(guò)多,及其服藥習慣性不一樣，導政漁藥應用相對性 錯亂,病菌的耐藥性狀況也越來(lái)越嚴重,因此在海產(chǎn)小動(dòng)物 中對抗生素藥物的選用和應用一定要有合理性,對病 甌菌揉應用抗菌素等用藥治療,務(wù)必參照其藥敏試驗試驗 結果,嚴苛遵循水產(chǎn)品藥品應用的有關(guān)要求﹐與此同時(shí)還需要注 愈穿行服藥及其藥品應用濃度值.盡量減少藥品的殘余， 此次科學(xué)研究為羅氏沼蝦豚鼠氣單廄菌評定及其病蟲(chóng)害劭治 給予一定的參考資料和理論基礎-

4結果

本分析從生病的羅氏沼蝦中分離出來(lái)出一糅病原菌- 豚鼠氣單胞菌,并根據對其菌體形狀特點(diǎn).生理學(xué)生物化學(xué)鑒 定并融合16SrRNA編碼序列剖析,可判定該病原菌為豚鼠 氣單慰菌.人力感柒試驗驗證了該病原菌對羅氏沼蝦 具備極強的高致病.藥敏試驗結果顯示該病原菌死對頭 泡曲松.氯霉素.氟苯尼考.四環(huán)素.鹽酸多西環(huán)素5種藥品 高寬比比較敏感,而對環(huán)丙沙星.環(huán)丙沙星.羅紅霉素.阿奇霉 素.新生兒菌素氨芐青霉素.復方新諾明和利福平8種藥品 耐藥性,因而可參照藥敏試驗結果對羅氏沼蝦豚鼠氣單 巍菌應用適宜的藥品開(kāi)展醫治﹐以達到最佳醫治效 果-水研究室選的環(huán)丙沙星和氯霉素僅用于科學(xué)研究菌棵 的耐藥性，并不可以用來(lái)生產(chǎn)制造,面氟苯尼考能夠 做為羅氏 沼蝦豚鼠氣單脫菌的首要醫治藥品。這也握醒養殖場(chǎng) 和科研生產(chǎn)制造員工在羅氏沼蝦飼養環(huán)節中,要在我國覺(jué) 許藥品應用范疇以?xún)?選擇最好眩感藥品用于開(kāi)展病 害預防,提升服藥的目的性，保證有效謹慎服藥,盡可能 降低藥品殘余.o研籠為進(jìn)一步討論羅氏沼蝦豚鼠氣 單胞菌的評定和預防給予一定的參照.