1.2.5 纖維素酶魅力的測量

分離出來(lái)菌種注射至LB液體培養基中，37℃塑造24h，連續傳代至第三代時(shí)獲得發(fā)酵物，離心式取上清液，即是菌種的粗酶液。CMC（羧甲基甲基纖維素）測定方法菌種生產(chǎn)纖維素酶的魅力。纖維素酶魅力界定為1mL酶液在50℃標準下1min水解反應羧甲基甲基纖維素造成1μg葡萄糖水即是一個(gè)酶魅力企業(yè)（U/mL）。
 

在其中：m：從標曲線(xiàn)性回歸方程測算得的葡萄糖水mg數；n：酶液稀釋倍數；0.5：測量時(shí)汲取稀釋液酶液mL數；30：表明反應速度分鐘數。

2 結果與探討

2.1 纖維素酶活力菌種的挑選

從9個(gè)試品中國共產(chǎn)黨分離出來(lái)出21株菌，所有 為革蘭氏陽(yáng)性病菌，經(jīng)CMC-Na固體培養基塑造，剛果紅染色液上色挑選，在其中有5株病菌可在CMC-Na固體培養基上產(chǎn)生全透明圈菌體，結果如圖所示1所顯示。W1和W2菌種，來(lái)自納豆激酶試品W，R菌種來(lái)自納豆激酶試品R，F3菌種來(lái)自水豆豉試品F，FS來(lái)自水豆豉試品FS。在其中，以F3菌種水解反應CMC-Na的能力最強，即纖維素酶活力最大，FS菌種的活力最少。因而，選擇來(lái)自發(fā)醇水豆豉的F3菌種做進(jìn)一步科學(xué)研究。

2.2 菌種的評定

2.2.1 組織學(xué)特點(diǎn)

F3菌種于LB固體培養基中37℃塑造24h，菌體及革蘭氏染色觀(guān)查結果如圖2所顯示。F3菌種可在LB固體培養基上產(chǎn)生奶白色、不全透明、邊沿不規律的環(huán)形菌體，表層光潔，突起，材質(zhì)粘稠金屬拉絲。菌細胞為革蘭氏染色呈陽(yáng)性，呈短桿狀，兩邊鈍圓，單獨排序，可產(chǎn)生顯著(zhù)的芽胞。

2.2.2 16SrDNA基因序列剖析

F3菌種的16SrDNA遺傳基因經(jīng)轉錄組測序得到編碼序列長(cháng)短為1437bp，根據BLAST剖析，發(fā)覺(jué)菌種F3與枯草芽孢菌屬開(kāi)放閱讀框最大，接著(zhù)將其與枯草芽孢菌屬內方式菌種的16SrDNA基因序列開(kāi)展多序列比對剖析，與此同時(shí)并以同為的Escherichiacoli方式菌種為外標，并運用NeighborJoining法搭建系統發(fā)育樹(shù)，結果如圖所示3所顯示。

由16SrDNA遺傳基因序列比對剖析得知，F3菌種與Bacillusamyloliquefacienssubsp.amyloliquefaciens、Bacillusamyloliquefacienssubsp.plantarum2個(gè)方式菌種的親緣關(guān)系近期，但2個(gè)方式菌種的16SrDNA基因序列經(jīng)兩端對齊核對剖析發(fā)覺(jué)二者開(kāi)放閱讀框超過(guò)99.5%，故沒(méi)法判斷F3菌種實(shí)際種的所屬。針對親緣關(guān)系較近的種間評定僅根據16SrDNA基因序列剖析是沒(méi)法達到的，需在其根本上憑借別的特殊看門(mén)基因序列搭建系統發(fā)育樹(shù)開(kāi)展協(xié)同剖析，如gyrA、gyrB、recA、pheS、rpoA等。

2.2.3 gyrB基因序列剖析

為了更好地進(jìn)一步評定F3菌種，對其gyrB遺傳基因開(kāi)展了PCR擴增及轉錄組測序，得到 了gyrB遺傳基因的一部分編碼序列，長(cháng)短為1115bp。將該菌種的gyrB基因序列同已經(jīng)知道枯草芽孢菌屬內不一樣方式菌種的gyrB基因序列開(kāi)展對比剖析，一樣并以同為的Escherichiacoli方式菌種為外標，制作根據gyrB遺傳基因的系統發(fā)育樹(shù)，如圖4所顯示。

解木薯淀粉枯草芽孢菌綠色植物亞種與解木薯淀粉枯草芽孢菌解木薯淀粉亞種的gyrB基因序列開(kāi)放閱讀框僅約為96%，而根據gyrB序列比對剖析發(fā)覺(jué)F3菌種與解木薯淀粉枯草芽孢菌綠色植物亞種親緣關(guān)系更近。因而，根據16SrDNA和gyrB遺傳基因序列比對剖析，可將F3菌種評定為解木薯淀粉枯草芽孢菌綠色植物亞種。