2.6 指紋圖譜創(chuàng )建及剖析

2.6.1 指紋圖譜的創(chuàng )建

取“2.1”項的標準品水溶液和“2.2”項下供試品水溶液，按“2.3.1”項的色譜儀標準，應用高效率液相色譜檢驗。所得的滿(mǎn)山紅葉HPLC對比圖普見(jiàn)圖4，15批滿(mǎn)山紅葉色譜儀累加圖見(jiàn)圖5。

圖4所顯示，該指紋圖譜尋找10個(gè)一共有峰，根據與標準品色譜比照，確定16號峰為杜鵑花素，并將9號峰做為參考S峰。

2.6.2 相似性剖析

選用“中藥材色譜儀指紋圖譜相似性點(diǎn)評系統”(2012版)，選用中位值法先后開(kāi)展15批滿(mǎn)山紅葉指紋圖譜的相似性點(diǎn)評，結果見(jiàn)表9。依據表9可以得到，15批滿(mǎn)山紅葉紋圖普總體相似性在0.986～0.999，均>0.9，具備較高的一致性。

2.6.3聚類(lèi)

將15批滿(mǎn)山紅葉的10個(gè)一共有紛紛總面積導進(jìn)SPSS 20.0，應用均值歐氏距離法，開(kāi)展聚類(lèi)，見(jiàn)圖6。歸類(lèi)結果顯示不一樣原產(chǎn)地滿(mǎn)山紅中藥材在歸類(lèi)間距上較遠，即便 同一原產(chǎn)地其分類(lèi)間距也出現顯著(zhù)差異?；酒饰?，很有可能與滿(mǎn)山紅中藥材采收時(shí)間、存儲方法、氣侯等相關(guān)。15批滿(mǎn)山紅葉在原產(chǎn)地和批號上其主成分類(lèi)型具備象征性，指紋識別圖普可以體現出試品的全景。

3 探討

本試驗供試品的做法，調查了不一樣獲取有機溶劑和獲取方法對滿(mǎn)山紅葉指紋圖譜的危害。在獲取有機溶劑層面，選擇了水、60%工業(yè)甲醇、稀酒精三種有機溶劑做為獲取有機溶劑，結果發(fā)覺(jué)，滿(mǎn)山紅干凍粉在三種有機溶劑中的溶解性都很好，可是以水作獲取有機溶劑的色譜不管在出峰數量或是分離度上均好于別的二種有機溶劑的色譜，因而挑選水做為獲取有機溶劑。在獲取方法層面，挑選了超聲波獲取法和流回獲取法，結果發(fā)覺(jué)，2種方式獲取的滿(mǎn)山紅葉色譜區別不大，可是超聲波獲取方式更為簡(jiǎn)單，因而挑選超聲波的辦法做為獲取方式。

本試驗針對色譜儀標準的明確，調查了離子交換柱、檢驗光波長(cháng)、流動(dòng)性相系統軟件，流動(dòng)速度、柱溫對滿(mǎn)山紅葉指紋圖譜的危害。在離子交換柱層面，選了Shim-Pack XR-ODSⅤ（2.0 mmi.d×150 mm）、Agilent Zorbax SB-C18(4.6 mm×150 mm,5μm）和YMC-Pack ODS-A(4.6 mm×250 mm,5μm）離子交換柱，結果顯示試品在A(yíng)gilent Zorbax SB-C18(4.6 mm×150 mm,5μm）和YMC-Pack ODS-A(4.6 mm×250 mm,5μm）中無(wú)法實(shí)現分離出來(lái)規定，而在Shim-Pack XR-ODSⅤ（2.0 mmi.d×150 mm）離子交換柱中不但出峰快、數量多并且分離度符合規定，因此 挑選Shim-Pack XR-ODSⅤ（2.0 mmi.d×150 mm）離子交換柱做為該試驗離子交換柱。

在檢驗光波長(cháng)層面，用二極管列陣探測器檢（DAD）中200～400 nm先后掃描儀標準品水溶液和供試品水溶液，數據顯示在檢驗光波長(cháng)297 nm處兩個(gè)試品均有較大消化吸收，色譜信息內容豐富多彩，杜鵑花素基線(xiàn)噪聲較高，因此采用297 nm為監測光波長(cháng)。在流動(dòng)性相系統軟件層面，選擇不一樣類(lèi)型有機相（工業(yè)甲醇、乙腈）和不一樣成份水相（0.3%苯甲酸溶液、0.3%冰醋酸溶液）組成的流動(dòng)性相對系統供試品水溶液色譜儀峰分離出來(lái)的危害，挑選乙腈-0.3%苯甲酸溶液、工業(yè)甲醇-0.3%苯甲酸溶液、工業(yè)甲醇-0.3%冰醋酸溶液等流動(dòng)性相系統軟件，數據顯示，乙腈-0.3%苯甲酸溶液流動(dòng)性相系統軟件不利試品的分離出來(lái)，出峰數量稀缺且分離度不太好，工業(yè)甲醇-0.3%苯甲酸溶液和工業(yè)甲醇-0.3%冰醋酸溶液流動(dòng)性相對系統試品分離出來(lái)區別不顯著(zhù)，可是工業(yè)甲醇-0.3%苯甲酸溶液流動(dòng)性相系統軟件色譜信息內容更豐富，分離度更強，故明確該流動(dòng)性相系統軟件做為該試驗檢驗的流動(dòng)性相。在流動(dòng)速度層面，挑選了0.1 mL·min-1、0.2 mL·min-1、0.25 mL·min-1開(kāi)展挑選。結果顯示，用0.1 mL·min-1流動(dòng)速度檢驗色譜儀峰出峰不徹底，用0.25 mL·min-1流動(dòng)速度檢驗色譜儀峰分離度不太好，用0.2 mL·min-1流動(dòng)速度檢驗色譜儀峰出峰數量徹底，分離度不錯，故明確流動(dòng)速度為0.2 mL·min-1。在柱溫層面，對25℃、30℃、35℃柱溫開(kāi)展挑選。結果顯示上升柱溫，分離出來(lái)作用下降，因而確認了25℃做為檢驗柱溫。

15批滿(mǎn)山紅葉的指紋圖譜總體相似性范疇0.986～ 0.999，均>0.9，相似性?xún)?yōu)良，15批滿(mǎn)山紅葉中杜鵑花素成分RSD為0.11%，說(shuō)明其成分并沒(méi)有顯著(zhù)差別，可是聚類(lèi)結果將15批滿(mǎn)山紅葉分成四類(lèi)，且10個(gè)一共有紛紛總面積的RSD范疇6%～30%，表明杜鵑花素的成分對其總體成分轉變危害不大，別的成分成分轉變起關(guān)鍵功效，基本剖析應當與滿(mǎn)山紅中草藥材原產(chǎn)地、生長(cháng)發(fā)育自然環(huán)境、采收時(shí)間、置放標準和置放時(shí)間等相關(guān)。

本分析應用高相液相色譜儀分析方法，創(chuàng )建了滿(mǎn)山紅葉的指紋圖譜，該指紋圖譜能夠 全方位呈現滿(mǎn)山紅葉成分的特性，適用因原產(chǎn)地、批號、生長(cháng)發(fā)育自然環(huán)境等要素的不一樣，發(fā)生的品質(zhì)不均勻一的滿(mǎn)山紅葉。該方式簡(jiǎn)單易行，指紋識別峰分離度好，具備較高的真實(shí)度，為事后滿(mǎn)山紅葉的科研開(kāi)發(fā)設計給予科學(xué)論證。