油菜子（BrassicanapusL.）歸屬于蕓薹科（Brassicaceae）蕓薹屬（Brassica），是在我國具體的糧食作物。伴隨著(zhù)2015年我國油菜子臨時(shí)性倉儲現行政策的注銷(xiāo)及其海外進(jìn)口沖擊性的危害，油菜子生產(chǎn)制造的非常經(jīng)濟效益比較嚴重降低，在較大水平上影響到了在我國農戶(hù)栽種油菜子的主動(dòng)性。甘藍型油菜子是由洋白菜和大白菜歷經(jīng)當然混種雜交后再翻倍后建立的，其2個(gè)先祖全是備受眾多顧客喜愛(ài)的爽口蔬菜水果，從發(fā)源與演變的視角看來(lái)，將油菜子開(kāi)發(fā)設計為蔬菜水果具備優(yōu)良的科學(xué)研究基本和不可估量的發(fā)展潛力。近些年在浙江省、湖北省、湖南省、江蘇省等長(cháng)江下游主產(chǎn)地，因時(shí)制宜匯總出“菜用 油用”、“菜用 花用 油用”等多種多樣油菜子高效率運用開(kāi)發(fā)方式。有研究表明，在合理的栽種標準下，獲得油菜薹后并不會(huì )對油菜子的生產(chǎn)量導致明顯危害，此方式可合理提升農戶(hù)栽種油菜子的生產(chǎn)制造經(jīng)濟效益。在長(cháng)江下游油菜子主產(chǎn)地，油菜子做為冬天農作物，不容易直接影響到關(guān)鍵農作物的栽種。運用冬閑田栽種油菜子，選用油蔬雙用技術(shù)性(即先割菜薹，后收油菜籽)，對提高油菜子栽種的整體效益，提升居民收入，推動(dòng)在我國油菜子產(chǎn)業(yè)發(fā)展規劃有著(zhù)關(guān)鍵實(shí)際意義。

油菜子小苗（5葉期）及其油菜薹上都富含充足的維他命C及其其他營(yíng)養元素，具備很高的吃用使用價(jià)值。培養高維他命C油菜薹種類(lèi)，既可提高油菜薹的菜用使用價(jià)值，也能為顧客帶來(lái)營(yíng)養健康的功能性蔬菜水果。維他命C又稱(chēng)之為抗壞血酸，是人體內必要的關(guān)鍵維他命之一。針對一個(gè)一般成人，身體需要的絕大部分其他維他命飲食強烈推薦供給量都是在20mg/d下列，而維他命C的飲食強烈推薦供給量卻為100mg/d，是身體中需要量最高的一種維他命，當身體比較嚴重缺乏維生素C的時(shí)候會(huì )造成壞血癥，還會(huì )繼續導致人體免疫力的降低。維他命C是蔬菜水果和瓜果中最普遍的抗氧劑，參加人體內的多種多樣氧化還原反應反映。有研究表明，維他命C不但能夠 預防癌癥，降低惡性腫瘤的發(fā)病率，還能夠改進(jìn)和增強身體的免疫功能，與此同時(shí)具備防止心腦血管疾病的關(guān)鍵作用。身體本身不能生成維他命C，務(wù)必要從新鮮的蔬菜水果、新鮮水果等食品中獲得。精確并迅速地測量出食材中的維他命C成分，對確保身體日常維他命C的攝入具備關(guān)鍵實(shí)際意義。

現階段測量食材中維他命C成分的檢查辦法具體有：碘酸鉀滴定法、熒光法、2,6-二氯靛酚滴定法、紫外線(xiàn)光度法、高效液相色譜色譜法等，但大多數實(shí)際操作繁雜、測量高效率不高的難題。在執行標準GB5009.86-2016中要求了高效液相色譜色譜法、熒光法、2,6-二氯靛酚滴定法為測量食物中抗壞血酸的方式 ，其中2,6-二氯靛酚滴定法，實(shí)際操作簡(jiǎn)易，可是假如試品中有黑色素等化學(xué)物質(zhì)會(huì )對滴定管結果產(chǎn)生危害；熒光法用時(shí)較長(cháng)；而高效液相色譜色譜法是一種簡(jiǎn)易、高效率、精確的測定法。但現階段國家標準中的液相色譜法選用的試樣前解決較為繁雜，一個(gè)試品從解決到上機操作檢驗最少必須15min，測量高效率不高。在對大人群樣版的維他命C開(kāi)展檢查時(shí)，怎么才能并精確挑選出高維他命C成分原材料，提升維他命C檢驗辦法的效果就變得至關(guān)重要。

維他命C是一種水溶維他命，化學(xué)式為C₆H₈O₆，分子結構中鄰近的2個(gè)甲基非常容易產(chǎn)生溶解并釋放出來(lái)H ，偏酸并具備較強的氧化性，造成 維他命C極為不穩定。更何況維他命C在恒溫標準下易溶解，試品的貯存標準危害檢查效果的精確性。因此本分析在國家標準的根基上提升了測量維他命C的液相色譜法，改善后的辦法可迅速精確地測量試品中維他命C的成分，與此同時(shí)運用液態(tài)氮儲藏并碾磨油菜子試品，促使該辦法可實(shí)際操作時(shí)間長(cháng)、檢驗結果可重復性好、精準靈巧、利用率高，能長(cháng)時(shí)間儲存，可用以大人群樣版中維他命C的剖析評定及基因遺傳分析，為進(jìn)一步科學(xué)研究油菜子中維他命C的生成和基因遺傳體制確立了方式基本，有益于培養含有維他命C的油菜子優(yōu)良品種。

1 原材料與方式

1.1 原材料

2018年10月至11月在中國農業(yè)科學(xué)院糧食作物研究室陽(yáng)邏實(shí)驗產(chǎn)業(yè)基地取于的油菜子小苗（甘藍型油菜子關(guān)系人群原材料，抽樣階段為栽種后30d上下）及其青菜（兔子腿矮腳黃）、油麥菜（西班牙全年度耐抽薹油麥菜）、西蘭花（小圓葉西蘭花）（每一種蔬菜水果的抽樣時(shí)間均處在可食情況）。每一種油菜子挑選5株尺寸相似的原材料（除掉油菜子的根莖和一部分枯黃），青菜、油麥菜、西蘭花一樣各取尺寸相似的5株（除掉蔬菜水果的根莖和一部分枯黃）。

1.2 儀器設備與實(shí)驗試劑

高效率液相色譜（e2695，英國Waters企業(yè)）、PDA探測器（2998，英國Waters企業(yè)）、離子交換柱（C18柱，柱長(cháng)250nm，內徑4.6nm，粒度5μm，英國Waters企業(yè)）、瓶塞分液器（5-50mL，法國Eppendorf企業(yè)）、萬(wàn)分之一天平秤（JJ124BC，昆山市雙杰檢測儀器廠(chǎng)）、十萬(wàn)分之一天平秤（AUW220D，日本安捷倫儀器企業(yè)）、均質(zhì)機（AD500S-P，上海市昂尼儀器設備有限責任公司）、超聲波清洗機（SB25-12DT，寧波新芝生物技術(shù)股權有限責任公司）、真空過(guò)濾設備（DET-01P，達爾拓企業(yè)）、多用途破碎機（JYS-M01，九陽(yáng)股份有限責任公司）。

硫酸（優(yōu)級純，國藥控股化學(xué)藥品有限責任公司）、超純水系統（色譜純，Rephile-watersystem)、維他命C標準物質(zhì)（純凈度99%之上，法國Sigma-Aldrich企業(yè)）、乙酸銨（優(yōu)級純，法國Sigma-Aldrich企業(yè)）、工業(yè)甲醇（色譜純，英國Fisher企業(yè)）。
尼龍66（Nylon）濾紙（直徑25mm、直徑0.45μm，天津津騰實(shí)驗儀器有限責任公司）、尼龍66（Nylon）濾紙（直徑13mm、直徑0.22μm，天津津騰實(shí)驗儀器有限責任公司）、微孔板水相濾紙（直徑50mm、直徑0.25μm，天津津騰實(shí)驗儀器有限責任公司）、2mL色譜儀氣相瓶（上海安譜試驗科技發(fā)展有限責任公司）、內置管（250μL，上海安譜試驗科技發(fā)展有限責任公司）。

1.3 方式

1.3.1 溶液的配制

萃取液（1%HCl水溶液）的配置：用移液器汲取10mL硫酸（優(yōu)級純）于1000mL容量瓶中，加超純水系統滴定劑，混勻儲備用。
流動(dòng)性相（20mmol/L的乙酸銨）：用萬(wàn)分之一的天平稱(chēng)取1.54g乙酸銨，融解于200mL的超純水系統中，超聲波15min后，再用超純水系統滴定劑至1000mL后再次超聲波減壓蒸餾15min。超聲波完畢后用真空過(guò)濾泵過(guò)微孔板水相濾紙（0.22μm）開(kāi)展旋蒸，過(guò)慮后的水溶液裝進(jìn)流動(dòng)性相瓶中預留。為防止因流動(dòng)性相的緣故危害檢查效果的精確性，20mmol/L的乙酸銨需現配現用。

維他命C標液(1000μg/mL)：用十萬(wàn)分之一的天平秤精確稱(chēng)量0.1g維他命C標準物質(zhì)于100mL深棕色容量瓶中，用1%的硫酸融解并滴定劑，充足混勻后置放在4℃冰柜中遮光儲存。

1.3.2 鮮試品的前解決

用萬(wàn)分之一的天平秤精確稱(chēng)量2g新鮮油菜子或蔬菜水果試品的葉子，放置50mL離心管架中，并添加40mL萃取液（即1%的HCl），用均質(zhì)機將試品徹底勻質(zhì)粉碎。用5mL注射針汲取已勻質(zhì)的試品勻漿，過(guò)雙層濾紙（0.45μm 0.22μm），滲瀝液過(guò)慮到250μL的內置管中，待上機操作檢驗。

試品存儲：將新鮮油菜子或蔬菜水果試品各自?xún)Σ卦?℃、-20℃、液態(tài)氮（-196℃）標準下。3d后，將儲藏在4℃、-20℃的一部分試品放進(jìn)液態(tài)氮中冷凍，用多用途破碎機碾成粉狀（用以前先用液態(tài)氮開(kāi)展急冷），并放置50mL離心管架中；剩下試品不開(kāi)展碾磨解決，立即稱(chēng)量2g試品，其他解決辦法和檢驗方式同樣。測量出不一樣貯存標準及其不一樣處理方法下油菜子和蔬菜水果試品中維他命C的成分。

1.3.3 高效率液相色譜（HPLC）的檢驗標準

離子交換柱，英國WatersXBridge-C18色譜柱；流動(dòng)性相，工業(yè)甲醇和20mmol/L乙酸銨（二者占比為7:93）；流動(dòng)速度，1.0mL/min；進(jìn)樣量，10μL；總體目標柱溫，25℃；檢驗光波長(cháng)，245nm；維他命C的保存期，2.7min。