迷迭香現在全世界各國廣泛栽培。迷迭香中含有多種化學(xué)物質(zhì)，主要成分為黃酮類(lèi)、萜類(lèi)、有機酸類(lèi)和其他類(lèi)，萜類(lèi)是含量最多的一類(lèi)，目前已經(jīng)分離鑒定的化合物有迷迭香酸、鼠尾草酚、鼠尾草酸、齊墩果酸和熊果酸。迷迭香酸易溶于甲醇、乙醇水溶液、水，而難溶于氯仿、石油醚等有機溶劑；耐高溫能力強，可耐受長(cháng)期240℃高溫油炸而保持高抗氧化能力，可代替熱不穩定的超氧化物歧化酶SOD作為自由基清除劑。迷迭香酸在不同植物中的含量各異，其應用價(jià)值也各不相同。迷迭香酸提取純化方法主要有水提法、有機溶劑提取法、超聲輔助提取法、微波輔助提取法、膜分離技術(shù)、大孔樹(shù)脂吸附法、結晶法等。水提法既提取出水溶性有效成分，同時(shí)也提出一些水溶性雜質(zhì)，如水提法分離的迷迭香酸粗品中含有較多的焦糖色素、蛋白和多糖類(lèi)雜質(zhì)，為后續純化增加了困難。超聲波和微波輔助提取法具有提取效率高、提取時(shí)間短的優(yōu)點(diǎn)，但均為輔助提取方法，且需超聲或微波設備。有機溶劑提取法可以有效減少一些水溶性雜質(zhì)的溶出，便于后續的分離和純化。目前采用乙醇提取得到的迷迭香酸粗品含量基本在3～6%。

本文以5%含量的迷迭香酸粗品為原料，優(yōu)選萃取劑種類(lèi)、萃取時(shí)間、次數、時(shí)間等因素，使產(chǎn)品中迷迭香酸含量大于≥35%（GB1886.172—2016《食品添加劑迷迭香提取物》要求大于5%），并且實(shí)現脫色，為實(shí)施迷迭香酸的工業(yè)化生產(chǎn)及應用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

實(shí)驗所用乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙醚、石油醚、正丁醇、三氯甲烷、正己烷、重鉻酸鉀、硫酸鈷、鹽酸等分析純試劑均采購國藥集團化學(xué)試劑有限公司。迷迭香干葉由河南尚佳農業(yè)科技有限公司提供。迷迭香酸標準品（含量：98%），購自西安利時(shí)生物科技有限公司。

1.2 儀器與設備

1260高效液相色譜儀：安捷倫科技有限公司；752N紫外可見(jiàn)分光光度計：上海精密科學(xué)儀器有限公司；GL-20G-C高速冷凍離心機：上海安亭科學(xué)儀器廠(chǎng)；BSA224S-CW電子天平：賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司；RE-52A旋轉蒸發(fā)器：上海亞榮生化儀器廠(chǎng)；RNF-0460卷式膜多功能小試設備：廈門(mén)世達膜科技有限公司；YC-1800噴霧干燥機：上海雅程儀器設備有限公司；20升多功能提取系統：河南寧爍儀器設備有限公司。

1.3 迷迭香酸粗品制備

取迷迭香干葉按1∶10加含75%乙醇水溶液（pH=2），加入到20L萃取罐中，85℃回流提取1.0h，放出萃取液，再加入8倍75%乙醇水溶液（pH=2），回流提取1.0h離心后，合并提取液，過(guò)四層紗布，閃蒸儀濃縮蒸餾出酒精，卷式膜過(guò)濾，噴霧干燥得含量約為5%粗品。

1.4 迷迭香酸含量及色度測定

1.4.1 標準品及樣品配制

用甲醇溶解標準品配置成0.2mg/mL迷迭香酸標準溶液。

將待測迷迭香酸粗品配制為2mg/mL的水溶液（pH=2），測定色度和迷迭香酸含量。

1.4.2 高效液相色譜法測定迷迭香酸含量

色譜條件：二極管陣列檢測器（DAD），流動(dòng)相為甲醇∶水=60∶40，流速為1mL/min，進(jìn)樣量為10μL。

1.4.3 色度標準曲線(xiàn)的繪制及脫色率的計算

（1）色度標準曲線(xiàn)的繪制

標準色度單位：1L水中溶解有1mg鉑和0.5mg鈷，稱(chēng)該溶液所具有的色度為1度。500色度標準使用液配制：稱(chēng)取0.0437g重鉻酸鉀和1.0g硫酸鈷，加水溶解后繼續加入0.5mL硫酸，配成500mL的溶液。以蒸餾水為對照液，在340nm～360nm的波長(cháng)范圍內測定500色度標準使用液的吸光度，選出最大吸收波長(cháng)。分別用移液槍移取1mL、2mL、3mL、4mL500色度標準使用液到四個(gè)5mL容量瓶中，加蒸餾水定容（稀釋后，色度分別是100、200、300、400）。在最大波長(cháng)處測吸光值。以溶液色度為橫坐標，以吸光值為縱坐標，繪制色度標準曲線(xiàn)。

（2）計算脫色率：

將提取液稀釋一定的倍數，在最大波長(cháng)處測吸光值，將吸光值代入色度線(xiàn)性回歸方程，求得產(chǎn)品色度。脫色率按下式計算：
 

1.5 萃取溶劑的選擇

稱(chēng)取9份10g原料，用60mL酸水溶解，離心去除不溶物。分別用1.0倍體積的乙醚、乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丁酯、乙醚、石油醚、正丁醇、三氯甲烷、正己烷進(jìn)行萃取，共萃取兩次，采用高效液相色譜儀檢測上下相中迷迭香酸的含量，確定最佳的兩相分配工藝。

1.6 溶劑萃取工藝優(yōu)化實(shí)驗設計

1.6.1 正丁醇萃取水相和含醇水相迷迭香酸的分配情況

分別用15%乙醇和純水溶解含量為90%的迷迭香酸樣品配制成0.2mg/mL樣液，加入等體積的正丁醇進(jìn)行萃取，各重復3份，測定上下相中迷迭香酸的含量。

1.6.2 正丁醇萃取不同pH水相迷迭香酸的分配情況

分別以不同pH的水相溶解含量為90%的迷迭香酸樣品，用等體積正丁醇萃取，分相后，高效液相色譜法檢測上下相中迷迭香酸的含量及分配情況。

1.6.3 萃取劑的選擇

按料液比1∶8加入酸水溶解迷迭香粗提物，離心去除不溶物，分別用乙醚、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、三氯甲烷、正丁醇、石油醚、正己烷萃取按照1∶1的體積比進(jìn)行萃取，共萃取兩次，檢測兩次萃取后上相和最后的下相迷迭香酸的含量。

1.6.4 四種萃取劑的對比實(shí)驗

選用含量為5%的迷迭香酸粗品，用pH2～3的酸水溶解配制為1mg/mL樣液，分別用等體積的正丁醇、乙酸甲酯、乙酸乙酯和乙酸甲酯萃取后，測定所得產(chǎn)品的色度及迷迭香酸的含量，確定最佳的萃取劑。

1.6.5 正交試驗設計

設計L₉（3⁴）的三因素三水平正交實(shí)驗考察萃取劑種類(lèi)、萃取水相的pH和萃取劑用量（為水相的倍數）對脫色率及含量的影響。

1.7 數據處理

采用SPSS16軟件進(jìn)行數據分析。

聲明：本文所用圖片、文字來(lái)源《中國食品添加劑》，版權歸原作者所有。如涉及作品內容、版權等問(wèn)題，請與本網(wǎng)聯(lián)系

相關(guān)鏈接：迷迭香酸，硫酸鈷，乙酸甲酯，石油醚