（2）不同提取溶劑下的凈化方式考察

苯甲酸在酸性下pH2.5～4.0時(shí)，抑菌活性最強，不溶于水，在堿性條件下，溶于水，在食品中添加苯甲酸鈉時(shí)，若食品為酸性食品，苯甲酸鈉會(huì )轉變成苯甲酸；山梨酸在乙醇中易溶，在水中極微溶解，酸性下，不溶于水，在堿性條件下，溶于水，在糕點(diǎn)中使用時(shí)，可加入山梨酸，也可以加入山梨酸鉀；糖精鈉易溶于水(1g/1.5mL)，微溶于乙醇(1g/50mL)，耐弱堿性；脫氫乙酸難溶于水，溶于苯、乙醚、丙酮及熱乙醇中，但在堿性條件下，溶于水，根據這4組分的性質(zhì)，本次試驗沒(méi)有同時(shí)含有4組分的陽(yáng)性樣品，選擇了陰性樣品(糕點(diǎn))進(jìn)行加標試驗，考察了水、1％乙醇(1％氨水)、5％乙醇(1％氨水)、1％氨水、5％甲醇(1％氨水)、10％甲醇(1％氨水)、水-乙酸鋅-氫氧化鈉7種提取溶劑對4組分峰的影響，稱(chēng)取糕點(diǎn)樣品14份，每種提取溶劑平行2份，精密加入混合標準使用液2.0mL，按樣品(無(wú)奶油蛋糕或面包、辣條、月餅)2g于50mL具塞離心管中，加5％乙醇(含1％氨水)提取，50℃超聲20min，冷卻至室溫，加219g/L亞鐵氰化鉀、106g/L乙酸鋅溶液各2mL，渦旋混勻，于10000r/min離心5min，上清液轉移至50mL容量瓶，殘渣再提取一次，合并2次濾液，定容至刻度。

取15mL提取液，加10mL正己烷，渦旋5min，離心后，吸取下層過(guò)濾上機分析，制備供試品溶液，上機測定，得到色譜圖，從圖中可以看出水-乙酸鋅-氫氧化鈉作為提取溶劑，存在峰拖尾現象，而且考慮到后期方法學(xué)以及高加入量回收樣品導致的色譜峰分離度達不到要求，故不考慮5％甲醇(含1％氨水)、10％甲醇(含1％氨水)；對于含油脂比較大的辣條類(lèi)糕點(diǎn)，采用水作為提取溶劑，提取效率不明顯，故也不考慮水作為提取溶劑。

因此，提取溶劑為1％乙醇(1％氨水)、5％乙醇(1％氨水)、1％氨水，為進(jìn)一步確定提取溶劑，本試驗對這3種提取溶劑進(jìn)行加標含量測定，稱(chēng)取糕點(diǎn)、月餅、辣條3類(lèi)樣品各3份，精密加入混合標準使用液2.0mL，樣品(無(wú)奶油蛋糕或面包、辣條、月餅)2g于50mL具塞離心管中，加5％乙醇(含1％氨水)提取，50℃超聲20min，冷卻至室溫，加219g/L亞鐵氰化鉀、106g/L乙酸鋅溶液各2mL，渦旋混勻，于10000r/min離心5min，上清液轉移至50mL容量瓶，殘渣再提取一次，合并2次濾液，定容至刻度。

取15mL提取液，加10mL正己烷，渦旋5min，離心后，吸取下層過(guò)濾上機分析。按上述制備供試品溶液，上機測定，外標法定量計算各組分含量，從表中可知，對于分類(lèi)為糕點(diǎn)的樣品，無(wú)論是糕點(diǎn)、月餅還是辣條，當提取溶劑呈偏堿性時(shí)，提取率更高，特別是油脂含量高的樣品，偏堿性的環(huán)境更好的保護這4種目標物的損失，故提取溶劑在5％乙醇(1％氨水)時(shí)，樣品所得4組分含量都是最高的，綜合考慮，提取溶劑選擇為5％乙醇(1％氨水)。

將篩選出來(lái)的堿性提取溶劑測定pH值，分別為：1％乙醇(1％氨水)pH為9.01～9.15；5％乙醇(含1％氨水)pH為9.04～9.15；1％氨水pH為9.25～9.40。然后用正己烷進(jìn)行提取，稱(chēng)取糕點(diǎn)樣品，經(jīng)過(guò)加標，混合標準使用液3.00mL，理論加標量150mg/kg，試驗上機測定，得到4組分含量結果見(jiàn)表4。

從結果中可見(jiàn)，當提取液pH呈酸性時(shí)，HLB對目標組分有保留，當呈堿性時(shí)，對目標組分保留較低，正己烷萃取1次導致的目標物損失也降低，若萃取2次會(huì )使糖精鈉與脫氫乙酸的峰更加接近，可能導致分離度達不到要求，且目標物會(huì )有損失，故去除提取液中油脂需在堿性條件下進(jìn)行。

5、方法學(xué)的考察

（1）線(xiàn)性關(guān)系考察

分別精密量取苯甲酸對照品51.28mg置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為2.0471mg/mL的苯甲酸儲備液；稱(chēng)取山梨酸對照品51.88mg置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為2.0690mg/mL的山梨酸儲備液；稱(chēng)取糖精鈉對照品55.10mg置25mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為1.9007mg/mL的糖精鈉儲備液，糖精鈉相對分子質(zhì)量為205.16，糖精相對分子質(zhì)量為182.16，兩者折算系數為0.8874，故折算為糖精濃度為1.6867mg/mL；稱(chēng)取脫氫乙酸對照品51.71mg置25mL量瓶中，加20g/L氫氧化鈉4mL溶解，用水定容至刻度，即得濃度為2.0477mg/mL的脫氫乙酸儲備液，對照品儲備液5.0mL至100mL容量瓶中，以水定容的混合標準使用液0.00mL、0.1mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL，分別至10mL容量瓶中，加水稀釋并定容至刻度，搖勻，即得到標準線(xiàn)性。

按上述色譜條件進(jìn)行上機測試，以峰面積為縱坐標，質(zhì)量濃度為橫坐標繪制標準線(xiàn)性，得到線(xiàn)性回歸方程及相關(guān)系數，采用信噪比法評估檢測限，利用已知低濃度的分析物樣品與空白樣品的測量信號進(jìn)行比較，確定能夠可靠檢出的最小的濃度，典型的可接受的檢出限信噪比是2:1或3:1，結果見(jiàn)表5，圖3，4組分線(xiàn)性關(guān)系良好，濃度范圍覆蓋1個(gè)數量級，相關(guān)系數均大于0.999，濃度范圍覆蓋了GB2760中要求的限量值(糕點(diǎn)類(lèi)1.09/kg)滿(mǎn)足食品檢測要求。表5結果表明，各基質(zhì)在本試驗方法下檢測限達到檢測要求，且比國標GB5009.28和SG5009.121要低。

聲明：本文所用圖片、文字來(lái)源《中國食品添加劑》，版權歸原作者所有。如涉及作品內容、版權等問(wèn)題，請與本網(wǎng)聯(lián)系

相關(guān)鏈接：脫氫乙酸，氫氧化鈉，山梨酸鉀，乙酸鋅