④根據100~1000uL量程的移液器檢定報告,移取800uL液體的誤差為士0.5%,則相對不確定度為:
綜上計算,在樣品的前處理過(guò)程中,由于移取試劑引入的不確定度為:
本實(shí)驗中所用的標準物質(zhì)為37種脂肪酸甲酯混合標準品,分析不確定度時(shí)選取C16∶0棕櫚酸進(jìn)行計算。由標準物質(zhì)證書(shū)信息可知混標中棕櫚酸甲酯的純度為99.90%,則由標準品純度引入的標準不確定度和相對不確定度分別為:
分別取6份鮮馬奶樣品進(jìn)行平行實(shí)驗,測定其棕櫚酸的含量,實(shí)驗結果如表2。
計算棕櫚酸含量的平均值,并依據貝塞爾公式計算出棕櫚酸含量的標準偏差S:
式中x為脂肪酸的含量,n為實(shí)驗的次數。根據不確定度的A類(lèi)評定標準,對于經(jīng)過(guò)平均的結果,平均值的標準不確定度采用平均值的標準差:
計算可知,6次測定鮮馬奶中脂肪酸含量的標準偏差S(rep)=0.361g/100g;測定方法重復性的標準不確定度為u(rep)=0.147g/100g;故測定鮮馬奶中的棕櫚酸時(shí),由方法重復性引入的不確定度為0.225%。
在評定測定鮮馬奶中脂肪酸的不確定度時(shí),通過(guò)進(jìn)行加標回收實(shí)驗來(lái)探究方法回收率引入的不確定度。選取脂肪酸譜圖中最具顯著(zhù)性的脂肪酸C16∶0棕櫚酸做加標回收實(shí)驗,所得數據如表3。
計算加標回收率的平均值,并依據貝塞爾公式計算出加標回收率的標準偏差S,根據不確定度的A類(lèi)評定標準計算回收率的標準不確定度,進(jìn)而得出相對不確定度,計算方法與4.2.4中相似。
計算可知,測定鮮馬奶中棕櫚酸的加標回收率的標準偏差S(R)=2.40%;標準不確定度為u(R)=0.980%;進(jìn)一步計算相對標準不確定度urel(R)=0.996%。故測定鮮馬奶中的棕櫚酸時(shí),方法回收率引入的不確定度為0.996%。
綜合各分量不確定度的結果,根據下式計算測定鮮馬奶中脂肪酸的合成標準不確定度:
參照標準JJF1059.1-2012測量不確定度評定與表示[24],對于大多數測定不確定度的評定,按正態(tài)分布取置信水平95%,k=2。實(shí)驗采用氣相色譜法測定鮮馬奶中脂肪酸的含量,并選取C16:0棕櫚酸為標志性脂肪酸計算了不確定度。按擴展不確定度計算公式:U=k×uc,計算得到脂肪酸的擴展不確定度為:U(C16∶0)=2.42mg/100g。
綜上,對于本次實(shí)驗的鮮馬奶樣品,其中棕櫚酸的含量可表示為:(65.4±2.42)mg/100g,k=2,p=95%。
將鮮馬奶樣品甲酯化后經(jīng)氣相色譜法測定其中的脂肪酸含量,結果表明鮮馬奶中脂肪酸組成較為豐富,具有獨特的營(yíng)養價(jià)值。選取含量較高的棕櫚酸C16∶0對該實(shí)驗方法進(jìn)行驗證,可知棕櫚酸甲酯在50.75~1015μg/mL范圍內有良好的線(xiàn)性關(guān)系;同一樣品的實(shí)驗重復性較好,符合常規實(shí)驗精密度的要求;選取線(xiàn)性范圍的最低點(diǎn)50.75μg/mL加標時(shí)信噪比符合常規實(shí)驗的檢出限,可初步作為實(shí)驗方法的檢出限參考值;在線(xiàn)性范圍內加標,驗證可知方法的回收率在94.58%~102.1%之間。
評定方法的不確定度時(shí),根據實(shí)驗操作和結果計算分析得出稱(chēng)取樣品誤差m、移取試劑體積誤差V、標準物質(zhì)純度誤差P、方法重復性誤差rep、方法回收率誤差R的不確定度分量分別為:0.000576%、1.55%、0.0578%、0.225%、0.996%。顯然,稱(chēng)取樣品引入的不確定度對總的不確定貢獻基本可以忽略不計,說(shuō)明采用該精度的天平足以達到要求;方法重復性引入的不確定度也較小,證明該方法復現性較強;標準物質(zhì)純度在實(shí)驗中需納入計算范圍,保證實(shí)驗結果的準確性;移取試劑體積和方法回收率引入的不確定度相對重要,在實(shí)際的實(shí)驗操作中需要從人為和儀器容器因素多方面保證精確度;每次實(shí)驗時(shí)同時(shí)做加標回收實(shí)驗,保證測定結果的準確性。
此外,在本文中為方便計算和討論,只選取了棕櫚酸C16∶0為例進(jìn)行分析。如需進(jìn)一步驗證氣相色譜法測定其他脂肪酸的含量及不確定度時(shí),可依照此方法增加相應的內容。
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