2結果與分析

2.1黑木耳胞外多糖紅外光譜鑒定

每升黑木耳發(fā)酵液能提取多糖244mg，純度為85.3%，FＴ-IR光譜顯示，黑木耳胞外多糖為具有典型β-吡喃糖結構的復雜多糖（圖1），官能團分析表明，在3419cm^-1處的寬峰是-OH伸縮振動(dòng)吸收峰，2973cm^-1和2918cm^-1處的弱吸收帶是-CH伸縮振動(dòng)吸收峰，1735cm^-1和1638cm^-1處的吸收峰表明含有糖醛酸，1383cm^-1是-CH彎曲振動(dòng)吸收峰，1078cm^-1和1048cm^-1處的吸收峰是C-O-H和C-O-C中的C-O引起的振動(dòng)吸收；880cm^-1是β-糖苷鍵的特征吸收峰。

2.2黑木耳胞外多糖的單糖組成分析

黑木耳胞外多糖經(jīng)過(guò)酸水解和衍生化后，利用HPLC分析其單糖組成。結果顯示，葡萄糖和木糖為其主要的單糖組分（物質(zhì)的量比為53.85%和25.05%），還有少量的甘露糖、果糖、巖藻糖、阿拉伯糖和葡萄糖醛酸（表1）。與紅外光譜分析結果一致，黑木耳胞外多糖是由多種單糖組分構成的雜合多糖。

2.3黑木耳胞外多糖對小鼠體重及臟體比的影響

與對照組相比，灌胃黑木耳胞外多糖后小鼠體重無(wú)明顯變化（圖2）。臟器系數是反映動(dòng)物器官發(fā)育的重要指標，可直觀(guān)反映受試物對動(dòng)物存在的毒害作用。本研究通過(guò)稱(chēng)量小鼠各臟器組織質(zhì)量，計算其臟器系數。黑木耳胞外多糖對小鼠臟器系數的影響見(jiàn)表2，統計分析顯示，樣品組與對照結果無(wú)顯著(zhù)性差異（P＞0.05）。上述試驗表明，灌胃黑木耳胞外多糖不會(huì )引起小鼠臟器發(fā)生病理性異常。

2.4黑木耳胞外多糖對小鼠腸道菌群的影響

本試驗利用微生物16SrRNA基因測序技術(shù)，探索了灌胃黑木耳胞外多糖小鼠腸道菌群的變化情況。測序所得原始數據經(jīng)篩選過(guò)濾后，對獲得的序列進(jìn)行可操作單元分析（OＴU）歸并劃分，采用Greengenes數據庫進(jìn)行注釋?zhuān)ㄟ^(guò)多種多變量統計學(xué)分析工具對不同樣本（組）微生物群落結構差異進(jìn)行分析，得到了小鼠腸道微生物16SrRNA在屬水平OＴU序列的相對豐度（圖3）。通過(guò)Metastats對樣本組間序列量差異的比較檢驗發(fā)現，與對照組相比，擬桿菌屬和羅氏菌屬顯著(zhù)增加（P＜0.05），擬桿菌屬在多糖組腸道微生物群中占（10.31±1.5）%，而對照組為（5.4±1.38）%；羅氏菌屬在多糖組中占（0.17±0.07）%，而在對照組中未檢測到。

2.5黑木耳胞外多糖對小鼠腸道短鏈脂肪酸含量的影響

腸道微生物通過(guò)膳食纖維的發(fā)酵和短鏈脂肪酸（SCFAs）的產(chǎn)生來(lái)提高能量利用率，從而提高宿主代謝效率。本試驗將小鼠糞便樣品按照冷凍干燥糞便樣品，準確稱(chēng)取50mg樣品，加入1.2mL磷酸鹽緩沖液（pH7.3）混勻，4℃14000r/min離心20min，吸取上清液至5mL離心管中。每200μL上清加入0.1mL的稀釋后硫酸（體積分數50%），充分混勻3min，用2mL二氯甲烷（色譜級）進(jìn)行萃取，4℃靜置2h，然后用0.22μm有機濾膜過(guò)濾。采用氣相色譜（GC）檢測樣品中短鏈脂肪酸的含量，樣品提取方法參照Z(yǔ)hao等并做部分修改。GC分析采用常規HP-FFAP（25m×0.32mm，0.5μm）配置柱，程序設定參照賈益群等在生物樣品脂肪酸提取與分析的研究結果，并調整其分流比為20∶1。SCFA標準品溶液的配置以及標準曲線(xiàn)繪制參照孟拓等對氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法分析腸道炎小鼠短鏈脂肪酸代謝研究結果。

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