4、基因突變株基因遺傳可靠性認證

由圖3得知，伴隨著(zhù)傳代頻次的增加，基因突變株NCU—A38、NCU—A17發(fā)生了一定程度上的衰落，產(chǎn)酶工作能力有些降低，集中化發(fā)生在傳代6次之后，最后在第九代各自降低至696.4 U/g、661.2U/g，降低力度分別為8.3％、7.7％；而基因突變株NCU—A55和初始菌種歷經(jīng)9代傳代培養后，中性化胰蛋白酶活各自為739.0U/g ，604.0U／g，僅降低0.4％、0.6％，降低力度較小，基因遺傳可靠性?xún)?yōu)良。綜合性考慮到基因突變株產(chǎn)中性蛋白酶魅力及基因遺傳可靠性，選擇基因突變株NCU—A55開(kāi)展后面科學(xué)研究。
 

5、基因突變株NCU—A55與初始菌種生長(cháng)發(fā)育特性及產(chǎn)胰蛋白酶系魅力比照

（1）基因突變株NCU—A55與初始菌種形狀觀(guān)查

ARTP對微生物菌種遺傳信息導致高寬比損害，能在短期內搭建大空間基因突變庫，其遺傳信息的更改一般會(huì )反映在基因型上。如圖4所顯示，初始菌種經(jīng)ARTP誘變后，其菌體形狀發(fā)生了十分明顯的轉變。誘變前，菌體正中間突起，菌體核心胞子遍布稀少，為淺黃色；誘變后的菌體大而平整，菌體核心胞子遍布圓潤，呈淺綠色，表明出基因突變菌種具備快速的成長(cháng)速率。而從圖5能夠看得出，顯微鏡下觀(guān)查到基因突變株NCU A55真菌的分裂枝點(diǎn)相對性初始菌種大量，真菌繁育工作能力更強；高倍顯微鏡下查看到基因突變株NCU—A55真菌的分生孢子頭比初始菌種較多且更聚集，產(chǎn)胞子工作能力更強。這與司曉光科學(xué)研究結果比較一致，其選用AIHP誘變技術(shù)性培育獲得一株增產(chǎn)酸堿性胰蛋白酶的基因突變株B一2，真菌較初始菌種短，分生孢子頭多，產(chǎn)胞子較快，在固態(tài)發(fā)酵全過(guò)程中基因突變株B一2的發(fā)育速度顯著(zhù)好于出初始菌種。Veerana等報導，熱電效應自然壓等離子技術(shù)誘變根據刺激性胞子增溶、細胞質(zhì)去極化、激話(huà)鈣和一些出芽有關(guān)遺傳基因，推動(dòng)了米曲霉胞子出芽工作能力的提高。正因如此，基因突變株生長(cháng)發(fā)育速率加速，產(chǎn)胞子增加的有益基因型不一定是由于A(yíng)RTP功效于體細胞核苷酸水準的分子式而造成菌體遺傳信息的更改，從而危害基因突變株的成長(cháng)新陳代謝；也是有可能是因為ARTP功效更改質(zhì)膜滲透性，促使細胞基質(zhì)造成很多臭氧等成份進(jìn)到體細胞，與分子伴侶相互影響，進(jìn)而更改生物大分子構像及活力，從而造成 基因突變株新陳代謝路徑的更改，并有可能會(huì )直接影響到菌體產(chǎn)胰蛋白酶工作能力。

（2）基因突變株NCU—A55與初始菌種產(chǎn)胞子工作能力比照

如圖所示6所顯示，基因突變株NCU—A55與初始菌種種曲培養液上的產(chǎn)胞子量在60h前并無(wú)顯著(zhù)性差異，但在72～84h時(shí)，基因突變株NCU—A55產(chǎn)胞子量明顯高過(guò)初始菌種（P＜0.05），并在72h時(shí)，基因突變株NCU—A55胞子量做到10.25×109CFU/g，較初始菌種提升 了39.3％，并實(shí)現公司對種曲的應用規定。根據基因突變株與初始菌種形狀比照的根基上，進(jìn)一步確認了基因突變株NCU—A55造成了有益的基因型，其產(chǎn)胞子工作能力較初始菌種明顯提高，有研究表明產(chǎn)胞子工作能力提高有益于推動(dòng)胰蛋白酶的代謝。曹曉梅選用ARTP融合化學(xué)誘變方式培育增產(chǎn)阿維菌素的基因突變株也獲得了相近的結果，正基因突變菌種主要表現為皺褶多，胞子豐腴，且與總體目標物質(zhì)呈成正比。

（3）胰蛋白酶系比照

由圖7a得知，基因突變株NCU—A55與初始菌種的中性蛋白酶魅力酒曲制作60h前并無(wú)顯著(zhù)性差異，在60～84h時(shí)，基因突變株的中性蛋白酶魅力明顯高過(guò)初始菌種，并在60h基因突變株的中性蛋白酶魅力最大，做到958.8U/g，較初始菌種酶魅力提高了14.7％；由圖7b和7c得知，基因突變株堿性蛋白酶魅力和酸堿性胰蛋白酶魅力最高值各自發(fā)生在酒曲制作60h、72h，做到435.9U/g、109.1U/g，比初始菌種降低13.5％、提高了14.2％。試驗結果與曹小琴運用低要N 電子束引入技術(shù)性培育生抽釀制用菌米曲霉結果比較一致，其培育的米曲霉基因突變株胰蛋白酶魅力比初始菌種提升 了36％，而本實(shí)驗操作中，選用新式的電子束引入技術(shù)性，ARTP誘變初始菌種，培育獲得的米曲霉基因突變株在其中性、酸堿性胰蛋白酶魅力均明顯提高，其有可能的因素是等離子技術(shù)中的活力顆粒功效于菌種體細胞，造成 菌種植物細胞和細胞的結構特征及滲透性發(fā)生改變并造成遺傳基因損害，進(jìn)而造成菌體一系列的生理學(xué)轉變 ，擴張了該菌種本身針對泥齡的要求，但相關(guān)堿性蛋白酶活力降低的因素也有待進(jìn)一步的科學(xué)研究。

三、結果

ARTP誘變米曲霉菌種NCU一110實(shí)際效果顯著(zhù)，誘變培育獲得基因突變株NCU—A55，淺盤(pán)酒曲制作復篩試驗確認其中性蛋白酶魅力較初始菌種提高了21.0％，曲醅酶魅力做到741.6U/g，基因遺傳可靠性?xún)?yōu)良。胰蛋白酶系對比實(shí)驗進(jìn)一步說(shuō)明基因突變株NCU—A55胰蛋白酶系以中性化酶魅力為主導的特性，且胰蛋白酶系詳細。在酒曲制作60h時(shí)中性蛋白酶魅力最大，做到958.8U／g，酶魅力較原始菌種酶明顯提高14.7％；根據形狀觀(guān)查及產(chǎn)胞子工作能力比照，發(fā)覺(jué)基因突變株NCU A55具備真菌生長(cháng)發(fā)育速度更快、產(chǎn)胞子工作能力明顯提高的有益基因型。本實(shí)驗為米曲霉菌苗的改進(jìn)帶來(lái)了新理念，為曲霉型水豆豉生產(chǎn)制造帶來(lái)了一株生長(cháng)發(fā)育速度更快、產(chǎn)中性蛋白酶高魅力的良好菌苗。事后試驗可進(jìn)一步研究其增產(chǎn)中性蛋白酶的基本原理及對原材料的利用率和發(fā)醇水豆豉的口味、味道特性。