一、目地和規定

①根據本試驗加重對凱氏定氮法測量基本原理的了解和了解。

②根據本試驗把握凱氏定氮法中試品消化吸收、水蒸氣蒸餾、消化吸收等專(zhuān)業(yè)技能的實(shí)際操作。

二、基本原理

本試驗是運用蛋白是中氮的有機物，當食品類(lèi)與鹽酸和金屬催化劑一同加溫消化吸收時(shí)，使蛋白質(zhì)分解，溶解的氮與鹽酸融合轉化成硫酸銨。隨后再脫灰水蒸氣蒸餾使氨分散，用硼酸消化吸收后再以硫酸標液滴定管，最終依據酸的使用量乘于計算指數，即是蛋白成分。

三、儀器設備

①500mL凱氏蒸發(fā)皿。

②定氮蒸餾裝置。

四、實(shí)驗試劑

①硫代硫酸鈉。

②硫酸銨。

③鹽酸。

④40g／L硼酸洗液。

⑤混和顯色劑。

⑥400g／L氫氧化鈉溶液水溶液。

⑦0.1000mol／L硫酸標液。

五、實(shí)驗步驟

1、試品的消化吸收

將大豆破碎，過(guò)40目篩，攪拌后精確稱(chēng)量黃豆面粉0.30g，當心移進(jìn)lOOmL干躁的凱氏蒸發(fā)皿中(勿粘附在瓶?jì)缺?，添加0.2g硫代硫酸鈉、3g硫酸銨及5mL鹽酸(1克試品加鹽酸15mL)，稍混勻后，將瓶以45^°斜支有石棉網(wǎng)的加熱爐上，先以文火遲緩加溫(燒開(kāi)的泡沫塑料不超過(guò)瓶肚的2/3)，待內容物全都碳化，泡沫塑料徹底停下后，提升火力點(diǎn)，并維持瓶里液態(tài)微沸，直到液態(tài)呈深藍色回應全透明后，再再次加溫0.5h，進(jìn)行消化吸收。

待消化酶冷至常溫后，用純凈水整潔地轉到lOOmL容量瓶中，并且用純凈水滴定劑，混勻，(消化酶在臨用前再稀釋液滴定劑)。

2、水蒸氣蒸餾與消化吸收

聯(lián)接好少量定氮蒸餾裝置，于水蒸汽產(chǎn)生瓶里盛水至2/3容量處，加甲基橙顯色劑數滴及鹽酸數mL，以保證水偏酸，添加數粒玻璃彈珠，加溫燒開(kāi)水蒸汽產(chǎn)生瓶里的水。查驗設備的密封性。

在接受瓶里添加25mL 40g/L硼酸及2滴混和顯色劑，將冷凝器下方插進(jìn)液位下列。精確量撤銷(xiāo)化封閉液lOmL經(jīng)布氏漏斗口添加反映管中，用少許純凈水清洗布氏漏斗。經(jīng)布氏漏斗再添加lOmL 40g/L氫氧化鈉溶液水溶液使其呈強偏堿，馬上夾好布氏漏斗夾，并加少許水于氣相布氏漏斗中密封，防止漏汽。夾持廢水排出口處的螺旋式夾，開(kāi)展水蒸氣蒸餾。水蒸氣蒸餾至冷凝器下端消化吸收液變成翠綠色逐漸記時(shí)，再次水蒸氣蒸餾3min后，將冷凝器頂尖提離液位再水蒸氣蒸餾1min，用純凈水清洗冷凝器頂尖后終止水蒸氣蒸餾。

3、滴定管

消化吸收液用0.1000mol/L硫酸標液滴定管至水溶液發(fā)生微鮮紅色在30s內不消退即是做到滴定終點(diǎn)。

4、試劑空白

不用試件，按以上實(shí)際操作開(kāi)展試劑空白。

六、結果解決   

式中：X——蛋白的質(zhì)量濃度，％；

c——HCl規范溶液的濃度，mol/L；

V₁——滴定管試品消化吸收液時(shí)耗費硫酸標液容積，mL；

V₂——滴定管空缺消化吸收液時(shí)耗費硫酸標液容積，mL；

V3——汲取消化酶的容積,企業(yè)為mL，mL ;

m——黃豆面粉的品質(zhì)，g；

氮的摩爾質(zhì)量，14.01g/mol；

F——大豆的蛋白質(zhì)含量計算指數(5.71)。

七、表明及常見(jiàn)問(wèn)題

①消化過(guò)程應留意旋轉凱氏蒸發(fā)皿，運用冷疑酸液將粘附在瓶?jì)缺诘奶苛_下去，以促消化徹底。

②試品含人體脂肪或糖較多時(shí)，易形成泡沫塑料，可添加小量辛醇或液體石蠟，或甲基硅油有機硅消泡劑，避免其外溢瓶外，并留意合理操縱熱原抗壓強度。

③硫代硫酸鈉具有催化反應，加快氧化分解。與此同時(shí)也是水蒸氣蒸餾時(shí)試品液脫灰的顯色劑，若所施加堿量不夠，溶解液展現深藍色不轉化成堿式硫酸銅沉積，需再提升氫氧化鈉溶液使用量。

④水蒸氣蒸餾全過(guò)程應留意連接處有沒(méi)有松漏狀況，水蒸氣蒸餾結束，先將水蒸氣蒸餾出入口離去液位，再次水蒸氣蒸餾1min，將粘附在頂尖的吸附液徹底洗入消化吸收瓶里，再將消化吸收瓶移走，最終斷電，決不能先斷電，不然消化吸收液將產(chǎn)生反吸狀況。