高脂肪飲食搭配可造成 血糖上升，比較嚴重時(shí)可造成一些傷害身體健康的病癥，如主動(dòng)脈粥樣硬化、心肌梗塞和慢性胰腺炎等，已成為了現代社會(huì )群體關(guān)鍵的營(yíng)養成分難題之一。除此之外，長(cháng)期性服用高脂肪飲食還可造成 體脂率出現異常累積和腸道微生物群的不平衡。根據飲食搭配干涉防止由高脂肪膳食導致的健康問(wèn)題正成為了科學(xué)研究的網(wǎng)絡(luò )熱點(diǎn)。

抗性淀粉在直腸中無(wú)法被酶解消化吸收，而在直腸中可被酵解，其根據上消化道進(jìn)到腸子，經(jīng)病菌進(jìn)行發(fā)酵造成短鏈脂肪酸，調整腸菌，降低血糖和碳水化合物，抑止脂肪細胞的消化吸收累積，改進(jìn)炎癥。盲腸是腸子的起止段，盡管盲腸、乙狀結腸是病菌最集中和多元化的地區，且二者內容物中有益菌構造具備相似度，可是優(yōu)點(diǎn)有益菌存有差別?，F階段有關(guān)盲腸中有益菌轉變 特點(diǎn)與改進(jìn)因高脂肪飲食搭配誘發(fā)血脂高和血糖高關(guān)聯(lián)的探討罕見(jiàn)報導。紫山藥（PurpleDioscoreaalataL）為多年生長(cháng) 蔓生植物薯蕷（DioscoreaalataL）的根莖，在中國沿海地區普遍栽種，木薯淀粉約占微生物總產(chǎn)量的16%～20%。

本分析以紫山藥高抗性淀粉為原材料，揭露紫山藥高抗性淀粉對盲腸微生物菌種的益生功效以及改進(jìn)高脂血癥效率，能為盲腸有益菌及脂質(zhì)代謝與身心健康的分析給予根據。

1原材料和機器設備

1.1原材料與實(shí)驗試劑

紫山藥（紫玉淮山），產(chǎn)于福建三明市建寧縣。普魯蘭酶（2800U/g）、高溫α-胃蛋白酶（8000U/mL），英國Sigma企業(yè)；木薯淀粉葡糖苷酶（100000U/mL），上海市麥克林生物化學(xué)高新科技有限責任公司；D-葡萄糖水診斷試劑盒，西班牙Megazyme公司；血糖檢測試劑盒，南京建成生物技術(shù)研究室；ＴIANampStoolDNAkit檢測試劑盒，天根生化高新科技有限責任公司；檸檬酸鈉、氫氧化鈉溶液、磷酸氫二鈉、工業(yè)乙醇均為國內分析純?；揪暳铣煞荩禾穷?lèi)與碳水化合物72.3%、蛋白14.9%、人體脂肪12.8%；高脂肪精飼料成份：酯化椰油5%，食用油5%，碳水化合物0.2%和基本精飼料89.8%。精飼料購自南通市特洛菲精飼料高新科技有限責任公司。

1.2關(guān)鍵機器設備與儀器設備

DHG-9003A型暖風(fēng)烘干箱，上海精宏實(shí)驗設備有限責任公司；SYQ-DSX-280B型高壓滅菌器，上海申安醫療器械廠(chǎng)；ＴDL-5-A型低速離心機，上海安亭科學(xué)研究?jì)x器廠(chǎng)；ＶERＴEX70型傅立葉光譜分析儀，法國布魯克分析儀企業(yè)；GA-3型測血糖儀器，三諾生物感測器股權有限責任公司；CFX96型熒光定量PCR儀，英國B(niǎo)io-Rad公司；PE300型IlluminaMiSeq轉錄組測序儀，英國Illumina企業(yè)。

2實(shí)驗方式

2.1紫山藥抗性淀粉的制取

紫山藥木薯淀粉的制取見(jiàn)參考文獻。將50.0g紫山藥木薯淀粉（干基），加至200mL硫酸銨緩沖液（0.2mol/L，pH5.0）中燒開(kāi)30min，減溫至58℃；添加普魯蘭酶（2800U/g）拌和12h；調整至7.0，120℃隔熱保溫30min，制冷至4℃儲藏24h，不斷2次；將沉積粉40℃干躁后，稱(chēng)量20.0g添加100mLpH6.0醋酸鈉緩沖液，提溫至90℃，添加0.3mL高溫α-胃蛋白酶（8000U/mL）維持1h，制冷至60℃并且用稀釋液的檸檬酸鈉調整pH至4.5，添加0.3mL木薯淀粉葡糖苷酶（100000U/mL）維持1h；以3000×g離心式15min，純凈水清洗木薯淀粉3次，摩爾分數95%酒精清洗3次，40℃干躁24h，破碎過(guò)100目篩，得高抗性淀粉（HRS）。系統檢測，HRS中的迅速消化吸收木薯淀粉、遲緩消化吸收木薯淀粉和抗性淀粉的成分各自為11.4%，28.4%和60.2%。

2.2 FTlR剖析

傅里葉變換紅外光譜分析（FＴIR）剖析依據Wang等的方式稍做改動(dòng)。將烘干的HRS試品與溴化鉀以1∶100～1∶150的比率實(shí)現混和，充足碾磨。將打磨好的粉末狀倒進(jìn)磨具中真空包裝壓片糖果，12MPa的工作壓力下維持30s，壓至全透明，在4000～400cm^-1掃描儀區域內運用傅里葉變換紅外光譜分析掃描機觀(guān)查。

2.3細胞模型創(chuàng )建

男性金黃地鼠，SPF級，6～8周齡，休重90～110g，購自北京市維通利華動(dòng)物實(shí)驗技術(shù)性有限責任公司。適應能力飼養1星期過(guò)后，將32只金黃地鼠任意分成4組喂養：一切正常對照實(shí)驗（NC）：基本精飼料 相等鹽水；實(shí)體模型組（MC）：高脂肪精飼料 相等鹽水；HRS小劑量組（LR）：高脂肪精飼料 0.5g/100gbw高抗性淀粉；HRS高使用量組（HR）：高脂肪精飼料 1.5g/100gbw高抗性淀粉。金黃地鼠隨意吃料、飲用水，10h/14h白天更替飼養4周。

2.4盲腸內容物搜集

在第2和第4個(gè)禮拜天忌食12h，各實(shí)驗組各自屠宰3只和5只金黃地鼠，搜集盲腸內容物包裝后于-80℃冷藏。

2.5血清蛋白指標值測量和內臟器官轉變

在第4禮拜天眼圈采血后處決，迅速脫離肝部、腎臟功能、肝臟、附睪囊腫和腎周的脂肪細胞合稱(chēng)重；將血夜搜集在采血管中，于4000r/min、4℃離心式15min，血清蛋白散裝在1.5mL離心管架中，于-20℃儲存預留；依照血糖測定試劑盒使用說(shuō)明測量甘油三脂（ＴG）、總膽固醇（ＴC）、密度高的蛋白碳水化合物（HDL-C）和高密度蛋白碳水化合物（LDL-C）的濃度值。

2.6 DNA獲取和16SrDNA遺傳基因PCR擴增

應用ＴIANampStoolDNAkit檢測試劑盒從金黃地鼠盲腸內容物中獲取DNA。以盲腸內容物中病菌基因為模版，以520F和802R為上中下游引物設計，增加16SrDNA的Ｖ4區。在其中，PCR反映管理體系（50μL）：10×Ｔaqbuffer5μL；dNＴP5μL；上游引物515F（20μmol/L）0.5μL；中下游引物設計806R（20μmol/L）0.5μL；Ｔaq酶0.5μL；模版1μL；ddH2O37.5μL。PCR反映標準：94℃3min；94℃45s，50℃60s，72℃90s，3五個(gè)循環(huán)系統；72℃10min。

2.7轉錄組測序數據信息的生物特征剖析

選用Illumina企業(yè)的ＴruSeqNanoDNALＴL(fǎng)ibraryPrepKit制取轉錄組測序百度文庫，在IlluminaMiseq轉錄組測序儀上開(kāi)展轉錄組測序；將轉錄組測序雜帶拼湊，依照與參考編碼序列≥97%的相似性聚類(lèi)算法，創(chuàng )建OＴU，并明確種型型。運用熱點(diǎn)圖和歸類(lèi)構成剖析（LEfSe剖析）各自科學(xué)研究金黃地鼠盲腸有益菌進(jìn)化速率和歸類(lèi)構成的轉變。

2.8數據分析

全部檢驗一式3份，選用DPS8.0程序包開(kāi)展應用統計學(xué)剖析。結果表明為：均值±相對標準偏差。方差分析按5%顯著(zhù)性檢驗開(kāi)展。