5、響應面BOX-Behnken試驗設計

在單要素試驗效果的根基上，對發(fā)醇培養液構成開(kāi)展響應面提升。選擇變量要素為A-魔芋精粉、B-酵母菌浸粉、C-Mn2² ，響應值(R1)為酶活。應用手機軟件Design-Expert10.0.7對以上要素開(kāi)展回應斜面多元回歸分析，對發(fā)醇培養液的構成開(kāi)展提升。BOX-Behnken實(shí)驗要素水準表如表1:

二、結果與剖析

1、菌種的剝離與挑選

將聚集細胞培養液的封閉液施膠于挑選培養液，產(chǎn)甘露聚糖酶的菌種會(huì )在培養液上生長(cháng)發(fā)育，為此來(lái)挑選菌種。選擇漲勢較好且菌體直徑大的10株單菌體進(jìn)到復篩，并定名為NSG-1、NSG-2、….NSG-10。

將挑選獲得的10株菌開(kāi)展搖瓶發(fā)醇，用DNS測定方法粗酶液酶魅力。結果如圖所示1所顯示，NSG-6在經(jīng)耐堿性試驗后酶魅力為1.78U/mL相對性最大，其一切正常酶魅力為2.05U/mL，故將其做為供試菌種。

2、菌種評定

PCR物質(zhì)瓊脂糖凝膠電泳結果即Marker構成見(jiàn)圖2。Marker中3000bp、1000bp和500bp雜帶濃度值為60ng/3μL表明為增亮帶，其他雜帶濃度值均為30ng/3μL，電泳原理方位從上到下。從電泳原理結果得知:PCR擴增物質(zhì)雜帶清楚、沒(méi)有托尾狀況，且相對分子質(zhì)量在1400bp上下與16SrDNA片段相符合，可開(kāi)展事后試驗。

轉錄組測序結果如圖所示3所顯示，NSG-6的16SrDNA序列共1473bp。將該編碼序列上傳至NCBI開(kāi)展BLAST，隨后用手機軟件MEGAX對16SrDNA序列開(kāi)展開(kāi)放閱讀框核對，一部分結果見(jiàn)表2。選用相鄰聯(lián)接法搭建NSG-6與相關(guān)病菌16SrDNA的系統發(fā)育樹(shù)(類(lèi)似的反復測算1000次)，結果見(jiàn)圖4。由開(kāi)放閱讀框核對結果和系統發(fā)育樹(shù)得知，NSG-6與EnterobacterludwigiiEN-119(NR042349.1)相似度做到100%，分辨其為路德維希腸桿菌。

3、響應面Box-Behnken試驗設計提升結果

（1）響應面設計方案結果

單要素試驗結果如下所示，培養液構成:魔芋精粉2.5%、酵母菌浸粉2.5%、MnSO₄0.5%；發(fā)醇標準:當然pH、接種量2.00%、發(fā)酵溫度35℃、搖床轉速比230r/min。

應用手機軟件Design-Expert10.0.7對培養液構成開(kāi)展響應面設計方案，結果見(jiàn)表3。再對其信息開(kāi)展多元線(xiàn)性回歸線(xiàn)性擬合，得到多元化回歸分析實(shí)體模型:

R1=4.85 0.84A 0.20B-0.26C 0.11AB-0.25AC 0.27BC 0.35A₂-0.24B₂-0.63C₂R₂=0.9958

在其中R1是預估的甘露聚糖酶的酶活，A是魔芋精粉加入量，B是酵母菌浸粉加上量，C是硫酸錳加上量。