目地運用超高效率液相色譜儀串連四級桿路軌阱質(zhì)譜分析(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS)技術(shù)檢查鑒定補陽(yáng)還五湯以及在人血液和小便中藥品成分。方式收集補陽(yáng)還五湯以及臨床醫學(xué)病人內服給藥后的血細胞和小便樣版，樣版經(jīng)80%工業(yè)甲醇污水處理后，選用Hyperil Gold C18色譜柱(1.0 mm×50 mm，1.9μm)，流動(dòng)性相為水(A)-乙腈(B)(各含0.1%苯甲酸和5 mmol·L?1醋酸銨)開(kāi)展梯度方向過(guò)柱，流動(dòng)速度0.3 mL·min?1，柱溫40℃。根據數據分析補陽(yáng)還五湯、給藥后代血液和給藥后代小便樣版，與此同時(shí)融合化學(xué)物質(zhì)的質(zhì)譜分析破裂規律性，表現其中藥制劑、含藥血液和小便中藥品成分。結果在湯藥中國共產(chǎn)黨評定了5五個(gè)化學(xué)物質(zhì)；在給藥后病人的血液中國共產(chǎn)黨評定了34個(gè)化學(xué)物質(zhì)；在小便中評定了23個(gè)化學(xué)物質(zhì)。這種成份主要是黃酮類(lèi)化合物、多糖類(lèi)、苯堿類(lèi)、苯酞類(lèi)和人參皂甙類(lèi)物質(zhì)。結果本科學(xué)研究全方位表明了補陽(yáng)還五湯以及在人血液和小便藥品成分，為揭露補陽(yáng)還五湯真真正正醫治腦中風(fēng)的藥力物質(zhì)條件給予了參照。

補陽(yáng)還五湯由黃芩生、當歸尾、白芍、地龍、羌活、紅花、杏仁等7味常見(jiàn)中藥構成，是養血活血化瘀的意味著(zhù)方[1]。補陽(yáng)還五湯常見(jiàn)于醫治腦顱損傷意外并發(fā)癥中腦缺血腦中風(fēng)。藥理學(xué)分析證實(shí)，補陽(yáng)還五湯能夠降低頸髓損傷位置的細胞壞死[4]，推動(dòng)腦栓塞后毛細血管轉化成，減少毛細血管體細胞粘附分子結構和栽培基質(zhì)金屬材料胰蛋白酶-9的表述，減少C-c反應蛋白和血糖水準，具備抗血管粥樣硬化功效等。補陽(yáng)還五湯醫治腦缺血腦中風(fēng)藥力準確，可是其藥力物質(zhì)條件尚不確立。中藥材藥力物質(zhì)條件科學(xué)研究是詮釋中藥材總體作用及功效實(shí)質(zhì)的主導階段，現階段對補陽(yáng)還五湯和其在身體的臨床藥理學(xué)的評定剖析已經(jīng)有相關(guān)的參考文獻報導，如Liu等運用高效率液相色譜儀-二極管列陣探測器-航行時(shí)間質(zhì)譜分析(HPLC-DAD-TOF/MS)技術(shù)性融合化學(xué)物質(zhì)精準分子離子和特點(diǎn)殘片正離子在補陽(yáng)還五湯中一共評定了54個(gè)化學(xué)物質(zhì)，主要是喹諾酮類(lèi)、黃酮類(lèi)化合物、多糖類(lèi)、大豆異黃酮類(lèi)、單萜苷類(lèi)、人參皂甙類(lèi)、有機物和碳水化合物。在身體的有關(guān)分析如沈曉等運用超高效率液相色譜儀-四極桿-航行時(shí)間質(zhì)譜分析(UPLC-Q-TOF-MS/MS)技術(shù)性融合精準相對性分子質(zhì)量和特點(diǎn)殘片離子對大鼠灌胃補陽(yáng)還五湯后的腦部中國共產(chǎn)黨檢驗到五個(gè)化學(xué)物質(zhì)，在血液中檢查到七個(gè)化學(xué)物質(zhì)，與此同時(shí)楊東輝等[10]運用高效率液相色譜儀-二極管列陣探測器-線(xiàn)形正離子阱質(zhì)譜分析(HPLC-DADitrap/MS)融合化學(xué)物質(zhì)精準相對性分子質(zhì)量、特點(diǎn)殘片正離子和紫外線(xiàn)消化吸收特點(diǎn)在豬的血清蛋白中國共產(chǎn)黨評定了4五個(gè)化學(xué)物質(zhì)，以上科學(xué)研究均為揭露補陽(yáng)還五湯的藥力物質(zhì)條件給予了試驗根據，可是其在臨床醫學(xué)上的有關(guān)科學(xué)研究并未見(jiàn)參考文獻報導，而藥品僅有進(jìn)到身體后才可以起到藥力，故對補陽(yáng)還五湯在人體內的臨床藥理學(xué)科學(xué)研究，更有利于詮釋其藥力物質(zhì)條件。本探討使用的超高效率液相色譜儀串連四級桿路軌阱質(zhì)譜分析(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS)技術(shù)性具備迅速、精確、敏感度高的特性，創(chuàng )建此統計分析方法對補陽(yáng)還五湯以及在人血液和小便藥品成分開(kāi)展迅速剖析，將為揭露其醫治腦缺血腦中風(fēng)的物質(zhì)條件給予更為有益的試驗根據。

1儀器設備與原材料

Vanquish UHPLC超高效率液相色譜、QE-HF-X型質(zhì)譜儀器、ST16R型冷凍離心機均來(lái)自于英國Thermo企業(yè)；血液采血管(英國B(niǎo)D企業(yè))；尿杯(上海市高創(chuàng )有機化學(xué)高新科技有限責任公司)；工業(yè)甲醇、水、苯甲酸、醋酸銨(LC-MS級)均購自英國Thermo企業(yè)，別的實(shí)驗試劑均為分析純。補陽(yáng)還五湯嚴苛遵循原方黃芩生120 g、當歸尾6 g、白芍415 g，地龍、羌活、杏仁、紅花各3 g配制水煎而成。阿魏酸(生產(chǎn)批號：EB04168；純凈度≥99%)、毛蕊大豆異黃酮苷(生產(chǎn)批號：EB07531；純凈度≥98%)標準品均購自上海市士鋒生物技術(shù)有限責任公司；黃芩人參皂甙Ⅲ(生產(chǎn)批號：B20567；純凈度≥98%)、洋羌活內酯H(生產(chǎn)批號：B21462；純凈度≥98%)標準品均購自上海源葉生物技術(shù)有限責任公司。

2方式

2.1臨床醫學(xué)樣版收集

任意選擇6名被診治為腦中風(fēng)病人(男孩和女孩參半)，忌食4 h，服食補陽(yáng)還五湯后，各自在1，2 h收集病人的血細胞和小便樣版，血液和小便離心式(3 000 r·min?1，10 min)，取上清液約0.5 mL，混和不一樣時(shí)間點(diǎn)的血細胞和小便樣版后冷藏儲存于?80℃，預留。

2.2樣版前解決

各自取補陽(yáng)還五湯、解除凍結后的血細胞和小便樣版100μL至EP管內，添加400μL含0.1%苯甲酸甲醇溶液，渦流波動(dòng)1 min，冰浴靜放5 min，以15 000 r·min?1、4℃下離心式10 min，取300μL上清液加LC-MS級水稀釋液至500μL，應用帶有0.22μm濾紙的移液管中以10 000 r·min?1、4℃下離心式10 min，搜集滲瀝液，氣相剖析。

2.3標準品切削液配置

高精密稱(chēng)加入適量的阿魏酸、毛蕊大豆異黃酮苷、黃芩人參皂甙Ⅲ和洋羌活內酯H標準品，放置10 mL深棕色量瓶中，用工業(yè)甲醇融解并稀釋液至標尺，混勻，各自配出濃度值為10.0，10.0，20.0，10.0 mg·mL?1的貯備液。各自取各標準品貯備液適當，放置同一個(gè)10 mL深棕色量瓶中，用工業(yè)甲醇稀釋液配置標準品混和切削液，儲存于?20℃電冰箱。

2.4 UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS剖析

離子交換柱為Hyperil C18(1.0 mm×50 mm，1.9μm)；流動(dòng)性相為水(A)-乙腈(B)(各含0.1%苯甲酸和5 mmol·L?1醋酸銨)；流動(dòng)速度為0.30 mL·min?1；氣相量為2μL。梯度方向過(guò)柱：0~2 min，2%B，2~12 min，2%→100%B，12~14 min，100%B，14~14.1 min，100%→2%B，14.1~16 min，2%B。掃描儀范疇挑選m/z 100~1 500；ESI源：毛細血管工作電壓為3.2 kV；鞘氣流動(dòng)速度：35 arb；輔助汽體流動(dòng)速度：10 arb；毛細血管溫度：320℃。MS/MS二級掃描儀為數據信息依賴(lài)感掃描儀。

2.5補陽(yáng)還五湯成分和其在人血及小便中藥品成分的評定

選用LC/MS標準對補陽(yáng)還五湯試品與人血及小便試品開(kāi)展檢測分析。根據較為補陽(yáng)還五湯試品、給藥組血液和小便的總離子流圖和化學(xué)物質(zhì)質(zhì)譜分析破裂規律性評定藥品成分，并對主要成分采

3結果

3.1 UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS色譜圖的收集

依據創(chuàng )建的檢測統計分析方法，在正、空氣負離子方式下收集補陽(yáng)還五湯試品和給藥人血液及小便試品的色譜，結果見(jiàn)圖1。