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甘藍型油菜乙酰轉移酶基因的克隆及功能驗證(二)

來(lái)源:鄭州天順食品添加劑有限公司 發(fā)布時(shí)間:2021-09-17 15:01:31 關(guān)注: 0 次
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2.2.2 蛋白二級結構預測分析與剖析

根據線(xiàn)上PredictProtein軟件對AT遺傳基因不一樣復制編號的蛋白開(kāi)展亞細胞定位發(fā)覺(jué)2個(gè)蛋白質(zhì)均精準定位在細胞核;TMHMM跨膜螺旋式區分析表明,2個(gè)蛋白質(zhì)均為膜外蛋白質(zhì),無(wú)跨膜結構工程。SOPMA構造預測分析說(shuō)明,AT蛋白質(zhì)中,無(wú)規律打卷占有率最大,均在43%上下,次之為x-螺旋式,約占35%,拓寬鏈約占18%,β-拐角約占4%,兩蛋白質(zhì)有一定差別(表4)。

2.2.3 蛋白三級構造預測分析與剖析

經(jīng)SWISS-MODEL同宗模型發(fā)覺(jué),114、148均融入酰谷丙轉氨酶實(shí)體模型,但其構像略不一樣(圖1,2)。

2.3 過(guò)表達與RNAi影響資產(chǎn)重組質(zhì)粒圖譜

AT遺傳基因的2個(gè)復制114與148過(guò)表達重組質(zhì)粒見(jiàn)圖3-A。AT遺傳基因的2個(gè)復制114與148RNAi重組質(zhì)粒見(jiàn)圖3-B。

2.4 轉基因水稻擬南芥檢驗

經(jīng)潮霉素挑選T0轉基因水稻擬南芥種籽后(圖4),對T1開(kāi)展pCambia1300-35s-114、pCambia1300-RNAi-114、pCambia1300-35s-148及pCambia1300-RNAi-148媒介潮霉素評定,結果顯示(圖5),目地質(zhì)粒T-DNA均已插進(jìn)擬南芥基因,說(shuō)明擬南芥轉基因水稻取得成功。

由表5得知,與野生型擬南芥種籽油酸各成份對比,影響114遺傳基因(114R)表述會(huì )造成 聚醚和脂肪酸成分極明顯的提升,提升力度分別為10.25%,38.33%,而軟脂酸和a亞麻酸是極明顯的降低,降低力度分別為10.57%,17.90%,明顯降低脂肪酸的成分,花生仁烯酸的成分也是有降低,可是差別不明顯;過(guò)表達114遺傳基因(35s-114)會(huì )造成 軟脂酸、脂肪酸和脂肪酸成分的明顯提升,提升力度各自做到15.52%,37.88%,12.33%,而聚醚、a亞麻酸和花生仁烯酸含萬(wàn)方數據量做到極明顯的降低,力度分別為50.22%,10.86%,29.93%。

在對飽和脂肪與不飽和脂肪剖析中,影響114遺傳基因會(huì )使飽和脂肪成分降低,對不飽和脂肪無(wú)明顯危害;過(guò)表達114遺傳基因會(huì )提升不飽和脂肪油酸的成分,而對飽和脂肪無(wú)明顯危害。

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