5、顯色反應時(shí)間危害

取50ml容量瓶一只，添加CAT樣液(酶促反應低于2U／mL)1.00mE、H202栽培基質(zhì)液2.00mL，25℃水浴反映30min后馬上添加1.5mL鹽酸停止反映，加碘酸鉀5mL，60℃水浴加熱40min，制冷，加木薯淀粉3mL，滴定劑，以純凈水作參比液，在光波長(cháng)600nm處測OD值A，與此同時(shí)進(jìn)行酶試劑空白OD值A₀測量，依據△A(△A=A₀一A)明確過(guò)氧化氫酶活力E。其他情況不會(huì )改變，只更改反應速度，測量5～70min內A值(圖3)。30min內OD值與時(shí)間有線(xiàn)性相關(guān)。不難看出，H₂O₂空氣氧化KI具備零級反應的特性，生成物初始濃度值立即影響了反應速率，40min后反映徹底。因此 顯色反應時(shí)間確認為40min。

6、酶促反應時(shí)間危害

取過(guò)氧化氫酶切削液10.00mL作檢測液，其他情況不會(huì )改變，更改酶促反應時(shí)間，測量△Ao以時(shí)間t為橫坐標軸，△A為縱軸作酶促反應曲線(xiàn)圖。由圖4得知：在反映原始環(huán)節的0～30min內，In△A與時(shí)長(cháng)正相關(guān)，合乎酶促催化反應一級反應特點(diǎn)。30min后，△A趨向穩定。因而，明確酶促反應時(shí)間為30min。

7、工作中曲線(xiàn)圖

取過(guò)氧化氫酶標液0.00—20.00mL作檢測液，在最好情況下進(jìn)行△A測量，制作工作中曲線(xiàn)圖(圖5)。過(guò)氧化氫酶魅力E(U／mL)在0.002～0.04U／mL范疇內與△A呈優(yōu)良的線(xiàn)性相關(guān)：△A=0.06843 16.9866E(U／mL)，r=0.9970。按實(shí)驗方法平行測定空缺10次，相對標準偏差s為0.01，檢出限為0.0018U／mL，最少檢測量做到0.15U。

8、影響實(shí)驗

取10.00mL過(guò)氧化氫酶標液作檢測液，依照實(shí)驗方式調查生物組織并存氧化性化學(xué)物質(zhì)影響狀況。結果發(fā)覺(jué)，2倍于基底液濃度值的葡萄糖水、葡萄糖、乳清蛋白、半乳糖不危害酶比活度測量，數據誤差低于5％。

9、試品剖析

H₂O₂是蛋白質(zhì)食物細胞的新陳代謝正中間物質(zhì)，因此肝部中有著(zhù)較多的CAT，試驗選擇魚(yú)肝部CAT萃取液做剖析。將購買(mǎi)鮮魚(yú)殺掉，脫離肝部，用過(guò)濾紙吸走，秤重，按1:10(w／V)添加1～4℃冷0.25mol／L綿白糖液，勻漿，1500r／min下離心式5min，取上清液，用0.25mol／L綿白糖稀釋液50倍，制取酶粗液，1～4℃自然環(huán)境中儲存。取酶粗液1.00mL進(jìn)行活力測量，平行面六次，測算均值和相對性相對標準偏差，測算利用率。

利用率操縱在96％～105％范疇內，表明粗酶液并存化學(xué)物質(zhì)不危害酶促反應測量；依據測量結果可計算出來(lái)魚(yú)肝CAT成分各自為550U／g(鯽魚(yú))和537U／g(鯉魚(yú))。