多管發(fā)酵、紙條法和酶底物法是當前測量地下水中糞沙門(mén)氏菌群的常見(jiàn)規范方式,根據三種方式對糞大腸菌群國家標準物質(zhì)和具體地下水樣開(kāi)展剖析檢驗,結果顯示:多管發(fā)酵、紙條法和酶底物法用以糞大腸菌群的檢驗結果具備一致性;根據三種方式利弊的比照,多管法低成本適用基本檢驗,紙條法高效率便捷更適用大批快速檢測,酶底物法使用簡(jiǎn)易,不會(huì )受到場(chǎng)所限定可立即當場(chǎng)檢驗,更適用緊急當場(chǎng)檢測。

序言

糞大腸菌群又被稱(chēng)為耐高溫大腸桿菌，是在44.5℃能生長(cháng)發(fā)育并發(fā)醇乳酸菌產(chǎn)酸脹氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陽(yáng)性菌呈陰性無(wú)枯草芽孢菌。自然環(huán)境地下水中的糞大腸菌群關(guān)鍵來(lái)源于排泄物的環(huán)境污染，因而根據測量水里糞大腸菌群的成分，可間接性得到水質(zhì)受排泄物嚴重污染的狀況，是目前世界各國環(huán)保監測單位關(guān)鍵檢測新項目之一，是點(diǎn)評水污染水平和清潔衛生的主要指標值，在《地表水環(huán)境質(zhì)量（GB3838—2002）》中，要求Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ及Ⅴ類(lèi)水糞大腸菌群的成分先后≤200、200～2000、2000～10000、10000～20000及20000～40000個(gè)/L，在我國地下水體糞大腸菌群成分廣泛較高，一部分海域成分乃至超出Ⅴ類(lèi)水質(zhì)檢測標準。

多管發(fā)酵、紙條法和酶底物法是當前中國測量地下水中糞大腸菌群常見(jiàn)的規范方式。多管發(fā)酵早在1985年就納入《生活飲用水標準檢驗方法（GB5750-85）》，并于2018年公布修訂本，是糞大腸菌群測量的傳統方式，它做為《水和廢水監測分析方法（第四版）》中的建議方式，英國公共衛生服務(wù)研究會(huì )（APHA）出版發(fā)行的《水和廢水標準檢驗方法（20版）》中方式9221E也選用的是多管發(fā)酵；紙條法在歐美資本主義國家應用較少，關(guān)鍵在一些發(fā)達國家應用，環(huán)境保護部在2015年公布了紙條法的規范方式，它做為《水和廢水監測分析方法（第四版）》中的建議方式（C類(lèi)方法）；酶底物法是一種新式酶技術(shù)性監測方式 ，已在美、日、韓和歐州眾多我國應用,2003年從國外引進(jìn)在我國，環(huán)境保護部在2018年公布了酶底物法的規范方式。三種方式均是糞大腸菌群檢驗的規范方式，但在方法檢出限、現場(chǎng)采樣和操作流程等存有差別，文中參考環(huán)保企業(yè)規范，各自從糞大腸菌群國家標準物質(zhì)和具體地下水樣開(kāi)展檢測分析和比照科學(xué)研究，并從檢測時(shí)間、成本費、自然環(huán)境等歸納出各方式的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)和應用領(lǐng)域，為眾多環(huán)保監測剖析工作人員依據具體情況和水質(zhì)采樣種類(lèi)挑選最好方式材料分析測試給予參考與參照。

1試驗一部分

1.1實(shí)驗試劑和原材料

乳清蛋白蛋白胨培養液，EC骨頭湯培養液，糞腸子紙條I、II型，糞大腸菌群有證國家標準物質(zhì)，DST(deflned)MMO-MUG酶底物實(shí)驗試劑，無(wú)菌水，呈陽(yáng)性菌種：腸子埃希氏菌ATCC25922，呈陰性菌種：產(chǎn)氣腸桿菌ATCC13048。

1.2儀器設備和機器設備

取樣瓶，防水防火式恒溫培養箱：GNP-9160，恒溫培養箱：HH.B11.420-135-Ⅱ，髙壓滅菌設備：YXQ-LS-100G，程序控制定量分析全自動(dòng)封口機：2009D,97孔定量分析盤(pán)，規范呈陽(yáng)性色度盤(pán)，接種環(huán)，1mL容量瓶，試管嬰兒：15mm×150mm。

1.3實(shí)驗方法

多管發(fā)酵HJ347.2—2018；紙條法HJ755—2015；酶底物法HJ1001—2018。

2試驗結果與探討

2.1空白試驗

空白試驗用無(wú)菌水做全程序流程空缺測量。(1)多管發(fā)酵：初發(fā)醇和復發(fā)醇的管內均無(wú)色調轉變 ，達到規范空缺規定；(2)紙條法：塑造后的紙條上無(wú)一切微生物菌種生長(cháng)發(fā)育，達到規范空缺規定；(3)酶底物法：塑造后的97孔定量分析盤(pán)里無(wú)顏色反應，達到H規范空缺規定。

2.2呈陽(yáng)性及陰性對照

按多管發(fā)酵、紙條法和酶底物法三種方式試驗需要做好塑造，呈陽(yáng)性菌種展現陽(yáng)性反應；呈陰性菌種展現陰性反應。

2.3糞大腸菌群國家標準物質(zhì)的結果（見(jiàn)表1)

由表1得知，三種方式對糞大腸菌群國家標準物質(zhì)的六次檢測結果均在可接納范疇（83～312067MPN/L）內；從規范試品檢驗效果的相對性相對標準偏差看來(lái)，多管發(fā)酵為3.37%，紙條法為2.44%，酶底物法為1.87%，均達到分別相匹配方式規范中相對性相對標準偏差的規定；從相對偏差看來(lái)，多管發(fā)酵為3.72%，紙條法為2.6%，酶底物法為3.34%，均達到分別相匹配方式規范中相對偏差的規定。

2.4具體地下水樣結果（見(jiàn)表2)

18個(gè)不一樣自然環(huán)境地下水樣與此同時(shí)用多管發(fā)酵、紙條法和酶底物法在同樣情況下開(kāi)展檢驗，為了更好地使數據信息成標準正態(tài)分布，先向信息開(kāi)展取對數后開(kāi)展應用統計學(xué)剖析，應用SPSS兩組開(kāi)展雙樣版配對t檢驗。

由表2數據信息還可以看得出，相關(guān)系數r各自為0.983、0.990、0.993，表明三組數據信息關(guān)聯(lián)性不錯；每組的t值各自為0.056、0.124、0.247，均低于t0.05(17)=2.110，表明三種方式對同一試品的解析結果無(wú)統計學(xué)意義上的顯著(zhù)性差異，即多管法、紙條法和酶底物法的研究結論具備一致性。

2.5三種辦法的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)比照（見(jiàn)表3)

由表3得知，從實(shí)驗過(guò)程看來(lái)，多管發(fā)酵必須 配備培養液并殺菌，開(kāi)展復發(fā)醇，剖析時(shí)間48h上下、檢測時(shí)間長(cháng)、操作流程繁瑣且在殺菌自然環(huán)境下檢驗；紙條法和酶底物法均可及時(shí)注射逐漸試驗，比較簡(jiǎn)單，酶底物法注射的勞動(dòng)量顯著(zhù)比多管和紙條法少許多，高效率最大，紙條法對比多管法來(lái)講不必開(kāi)展復發(fā)醇，高效率比多管法高。從實(shí)驗儀器看來(lái)，紙條法只必須 防水防火恒溫箱，多管法和酶底物法除開(kāi)防水防火恒溫箱外，均還必須一個(gè)機器設備。從資金成本費看來(lái)，單獨試品的費用多管發(fā)酵最少，次之為紙條法，酶底物法成本費最大。

3總結

根據多管發(fā)酵、紙條法和酶底物法對規范試品和具體地下水樣的試驗比照科學(xué)研究得知，同一試品三種方式對糞大腸菌群檢驗結果無(wú)應用統計學(xué)上顯著(zhù)性差異，其結論具備一致性。他們做為環(huán)保等級方式，都各有優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)，可依據不一樣的前提和需求選取適宜的方式 。多管發(fā)酵和紙條迅速法早已列入《國家地表水環(huán)境質(zhì)量監測網(wǎng)監測任務(wù)作業(yè)指導書(shū)（試行）》的特定方式。

總的來(lái)說(shuō)，多管發(fā)酵運用極其普遍，適用水質(zhì)采樣稀釋倍數不明的情形和環(huán)保監測單位的常用檢驗；紙條法更適用大量試品的快速檢測；酶底物法雖成本費價(jià)格昂貴，但使用簡(jiǎn)易，對檢驗自然環(huán)境并沒(méi)有特別要求，更適用自然環(huán)境安全事故緊急檢測。