2.2基于原植物親緣學(xué)及化學(xué)成分特有性證據的Q-marker預測

茵陳為菊科多年生長(cháng)草本植物艾屬濱蒿或茵陳蒿的干燥地上部分．艾屬中除了茵陳蒿，還有艾草、青蒿及牡蒿等植物．艾屬中揮發(fā)油屬于其主要次生代謝產(chǎn)物，是艾屬類(lèi)植物的主要藥效部位之一，用其作為Q-marker的預測有一定的意義．艾屬藥材中的揮發(fā)油主要以倍半萜類(lèi)化合物為主，萜類(lèi)化合物的生源途徑均為甲戊二羥酸途徑，由焦磷酸香葉酯(GPP)衍生成無(wú)環(huán)單萜或者通過(guò)異構化酶作用轉化成焦磷酸橙花酯(NPP)，再生成各類(lèi)環(huán)狀單萜．其中茵陳的代表成分有大牛兒烯D、α-葎草烯及石竹素等．茵陳根據其采收時(shí)節可分為綿茵陳和茵陳蒿，春季采收為綿茵陳，秋季采收為茵陳蒿．由于采收時(shí)節的不同，茵陳所含的成分出現了差異，相關(guān)標準收載綿茵陳的含量測定中綠原酸含量不少于0.5%，茵陳蒿的含量測定中濱蒿內酯不少于0.2%．通過(guò)分析艾屬的親緣關(guān)系，可將大牛兒烯D、α-葎草烯及石竹素作為茵陳的Q-marker.

2.3基于傳統功效的Q-marker預測

中藥的傳統功效是在中醫理論指導下，通過(guò)長(cháng)期的實(shí)踐總結而來(lái)的有效使用方法，因此基于傳統功效對茵陳的質(zhì)量標志物預測有一定的必要性．茵陳的使用歷史比較久，《神農本草經(jīng)》記載將其列為上品，《傷寒論》中記載茵陳用來(lái)治療瘀熱發(fā)黃，《千金方》中其用來(lái)治療風(fēng)癢疥瘡，《金匱要略》中其用來(lái)治療黃疸濕重熱少．茵陳能夠利濕退黃、清熱解毒，在治療黃疸方面是一味非常重要的中藥材．茵陳的現代藥理作用有利膽、保肝、解熱鎮痛、抗炎、抗病毒、抗腫瘤及降血壓等作用．王守軍研究發(fā)現，萜類(lèi)化合物具有抗腫瘤、鎮定、抗病毒及提高免疫力等效果．廖天錄等研究發(fā)現，香豆素具有利膽作用．牛篩龍等研究發(fā)現，總黃酮對急性肝損傷具有保護作用．茵陳萜類(lèi)化合物、香豆素類(lèi)和黃酮類(lèi)與其有效性密切相關(guān)，作為主要藥效物質(zhì)基礎，可考慮作為茵陳的潛在Q-marker.

2.4基于傳統藥性的Q-marker預測

“性味”即四氣五味，是中藥的特有屬性，反映了中藥的本質(zhì)特征，是中藥藥性理論的核心．中藥臨床藥理研究表明，中藥的化學(xué)成分與其藥性具有一定的相關(guān)性．茵陳味苦、辛，性微寒，歸肝、膽、脾經(jīng)．研究表明，苦、寒藥物的物質(zhì)基礎以生物堿和苷類(lèi)成分為主，辛味藥的化學(xué)成分多以黃酮類(lèi)、萜類(lèi)和揮發(fā)油為主，結合茵陳含有的化學(xué)成分種類(lèi)，可將萜類(lèi)化合物和黃酮類(lèi)化合物作為茵陳質(zhì)量標志物的Q-marker.

2.5基于化學(xué)成分的Q-marker預測

陳志娜等研究發(fā)現，用70%乙醇提取茵陳得到總黃酮(主要成分為金絲桃苷和槲皮素)與總多酚含量最高，抗氧化活性最強．張影等以綠原酸為內參物，計算茵陳標準湯劑中新綠原酸與咖啡酸等7種成分的相對校正因子，從而計算出7種成分的含量，并與常規外標法實(shí)測含量值沒(méi)有顯著(zhù)差異，一測多評法可作為茵陳標準湯劑多指標成分定量分析的首選方法．熊耀坤等利用GC-MS法對茵陳提取的揮發(fā)油成分進(jìn)行鑒定分析，得出茵陳鮮品的揮發(fā)油含量高于茵陳干品，應注意茵陳產(chǎn)地加工干燥過(guò)程的質(zhì)量控制和藥材保障．張慧等利用分光光度法，以獐牙菜苦苷為對照品，經(jīng)HCl水解，2,4-二硝基苯肼乙醇試液和Na OH 60%乙醇溶液顯色后，于444 nm波長(cháng)處測定藏茵陳總環(huán)烯醚萜苷含量，該方法準確、簡(jiǎn)單、穩定性好，可用作測量總環(huán)烯醚萜苷含量的首選方法．吳小可等采用HPLC法，以甲醇和0.2%的甲酸(48∶52)為流動(dòng)相測定菊科植物中總黃酮醇苷含量，結果表明，槲皮素、異鼠李素2種黃酮類(lèi)化合物分別在1.06～212μg/m L、0.93～186μg/m L濃度范圍內線(xiàn)性關(guān)系均良好，該方法可作為茵陳槲皮素和異鼠李素含量測定的一種方法．茵陳色原酮對急性乙醇性肝損傷具有保護作用，可在體內與人血清白蛋白結合而發(fā)揮穩定的生物活性作用，可抑制β-葡萄糖醛酸酶的活性，使葡萄糖醛酸不被分解，從而加強肝臟解毒作用．麥爾旦·吐?tīng)栠d麥麥提等利用薄層層析、硅膠反復柱層析、波譜分析技術(shù)和理化常數對照的方法，從80%乙醇提取物中分離并鑒定出了茵陳色原酮，且對其碳譜數據進(jìn)行了歸屬．張啟偉等利用UV、MS與HNMR確定茵陳中3'-甲氧基薊黃素的結構，采用HPLC分離與面積歸一化法計算3'-甲氧基薊黃素含量，可用作3'-甲氧基薊黃素定量分析的方法．馮藝飛利用大孔吸附樹(shù)脂對茵陳總黃酮進(jìn)行分離純化，通過(guò)顯色反應、紅外光譜、液質(zhì)聯(lián)用、FT-IR譜圖及LC-MS分析等方法，確定出茵陳提取物中含有黃酮類(lèi)化合物，并推斷鑒定出含蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷、異鼠李素-3-O-葡萄糖苷和香葉木苷幾種成分．廖彥等利用HPLC指紋圖譜、RRLC-MS/MS及HPLC-DAD方法確定了茵陳的8個(gè)共有峰并對8個(gè)共有峰的化學(xué)成分進(jìn)行了指認．李楊楊等利用HPLC方法，將濃度設置在3.9～500μmol/L內可以使得6,7-二甲氧基香豆素的峰面積之間的線(xiàn)性關(guān)系良好．以上多種成分可為茵陳Q-marker的預測提供一定的參考．

3討論

茵陳作為我國的傳統中藥，其資源豐富，藥用歷史悠久，且臨床療效突出．相關(guān)研究表明，茵陳具有利膽、保肝、降血壓、抗腫瘤、抗病毒、解熱鎮痛以及提高免疫功能等作用．茵陳中的化學(xué)成分復雜，容易受采收時(shí)節的影響．現行標準將茵陳中的綠原酸作為其指標，但綠原酸屬于苯丙素類(lèi)化合物，在其他植物中也存在，如金銀花等．因此，建立科學(xué)、合理的質(zhì)量評價(jià)方法，對茵陳的質(zhì)量進(jìn)行全面準確地評價(jià)并指導茵陳資源的合理開(kāi)發(fā)利用以及對茵陳產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展具有重要的現實(shí)意義．

本研究依據Q-marker理念，基于網(wǎng)絡(luò )藥理學(xué)從成分有效性的角度對茵陳進(jìn)行研究，發(fā)現茵陳成分中13個(gè)活性成分可通過(guò)AKT1、TNF、JUN、MAPK1、RELA、TP53及IL6等靶點(diǎn)作用于癌癥、乙型肝炎及TNF等關(guān)鍵信號通路發(fā)揮藥理作用．并對茵陳的生源途徑和成分特異性、傳統功效、傳統藥性以及化學(xué)成分可測性進(jìn)行了預測．利用網(wǎng)絡(luò )藥理學(xué)方法來(lái)篩選出數據庫中的有效成分并與其他預測方法的結果進(jìn)行比較，可以豐富篩選成分，有利于更好地確定Q-marker．結果表明，茵陳的黃酮類(lèi)成分主要有槲皮素與異鼠李素，揮發(fā)油的主要成分為大牛兒烯D，甾醇類(lèi)主要化合物為β-谷甾醇，香豆素類(lèi)的主要化合物為6,7-二甲氧基香豆素與馬栗樹(shù)皮素二甲醚，色原酮類(lèi)化合物主要為茵陳色原酮．研究表明，槲皮素、異鼠李素和β-谷甾醇廣泛存在于大多數的藥用植物中，不符合成分特有性的特點(diǎn)，不適合作為茵陳的Q-marker．而茵陳蒿靈A屬于茵陳特有成分，馬栗樹(shù)皮素二甲醚存在于茵陳花序和花蕾部分，且在花蕾中含量最高，在開(kāi)花季節其含量可達1.98%，隨即迅速降低，具有可檢測特點(diǎn)，而大牛兒烯D是茵陳揮發(fā)油的主要活性部位，6,7-二甲氧基香豆素和茵陳色原酮具有利膽，促進(jìn)膽汁分泌的作用，體現了茵陳的主要藥效作用，以上幾種成分可以為茵陳Q-marker的控制和篩選提供科學(xué)的理論依據，以便于建立合理的茵陳質(zhì)量控制及溯源體系．

Q-marker的預測途徑在劉昌孝院士最初提出的傳遞與溯源、有效、特有、可測及處方配伍的“五原則”基礎上，又衍生出了藥動(dòng)學(xué)與體內過(guò)程相關(guān)性，不同產(chǎn)地化學(xué)成分特有性，可入血化學(xué)成分以及不同加工方法等途徑．Q-marker的預測途徑的增多，篩選出來(lái)的成分也越來(lái)越多，使得Q-marker的預測也產(chǎn)生了一定的問(wèn)題．如，根據不同預測途徑篩選出一定的Q-marker，應該通過(guò)怎樣的方式對篩選出來(lái)的Q-marker進(jìn)行取舍;根據植物的親緣性進(jìn)行Q-marker的預測，遇到不同科，不同屬的植物含有相同的成分，那么該成分屬于哪一種植物的Q-marker;Q-marker的預測是根據什么標準來(lái)確定其可以作為質(zhì)量標志物;Q-marker的預測主要是通過(guò)查閱文獻進(jìn)行內容整合，但是忽略了中藥成分的未知性的特點(diǎn)，那么現已預測的Q-marker是否準確等等．網(wǎng)絡(luò )藥理學(xué)主要是利用現有的中藥數據庫完成高通量的計算機虛擬篩選，將已有的數據進(jìn)行分析和整合來(lái)獲取相關(guān)的成分、靶標與通路．中藥材具有多成分與多靶點(diǎn)的特點(diǎn)，不同藥材中含有相同成分，利用網(wǎng)絡(luò )藥理學(xué)方法來(lái)篩選出數據庫中的有效成分與其他預測方法的結果進(jìn)行比較，可以豐富篩選成分的多樣性，有利于更好地找出Q-marker．但網(wǎng)絡(luò )藥理學(xué)篩選的是藥材中含有的成分，并沒(méi)有將單味藥材中特有成分或加工過(guò)程中形成的可以定性定量的特有化合物區分出來(lái)．文獻分析是有目的性地去篩選單味藥材，將藥材各個(gè)方面的研究結果歸納總結起來(lái)，如將炮制工藝、采收時(shí)節與藥材配伍等因素考慮在內得出的具有專(zhuān)屬性、有效性和安全性的化學(xué)成分．因此會(huì )出現網(wǎng)絡(luò )藥理學(xué)研究結果和文獻分析結果矛盾的情況．因此，Q-marker的建立應該建立在“位”“量”“性”“效”的基礎上，利用網(wǎng)絡(luò )藥理學(xué)與文獻分析等方法來(lái)實(shí)現Q-marker的定位，利用代謝組學(xué)與含量測定等方法來(lái)實(shí)現量的確定，利用指紋圖譜與判別分析來(lái)實(shí)現定性鑒別，最后利用體內體外藥理實(shí)驗來(lái)實(shí)現效的驗證．只有將“位”“量”“性”“效”結合起來(lái)，綜合分析得出的結論才具有可信度，才可以為質(zhì)量標準的建立提供依據．