4.2基于成分特有性的四逆散Q-marker預測分析

柴胡為傘形科植物柴胡Bupleurum chinense DC.或狹葉柴胡Bupleurum scorzonerifolium Willd.的干燥根，主要含有皂苷、揮發(fā)油、有機酸、黃酮及甾醇類(lèi)，其中起主要作用的柴胡皂苷屬于三萜皂苷類(lèi)化合物。三萜皂苷類(lèi)成分主要通過(guò)甲戊二羥酸途徑合成，由3分子的乙酰輔酶A縮合后，在酶的作用下催化成了含有6個(gè)碳原子的甲羥戊酸（MVA），再經(jīng)過(guò)一系列的反應得到了異戊烯焦磷酸（IPP），異戊烯焦磷酸異構化變成了二甲丙烯焦磷酸（DMAPP）；IPP和DMAPP頭尾縮合得到了含有10個(gè)碳原子的焦磷酸香葉酯（GPP），進(jìn)一步在法尼基焦磷酸合酶（FPS）的作用下，將IPP與GPP結合產(chǎn)生了含有15個(gè)碳原子的法尼基焦磷酸（FPP）；2分子的FPP尾尾縮合，在鯊烯合酶（SS）的催化下生成了反式角鯊烯，再經(jīng)鯊烯環(huán)氧酶（SE）的作用，反式角鯊烯在C-2和C-3的位置環(huán)氧化成了2,3-氧化鯊烯；以2,3-氧化鯊烯為底物，經(jīng)過(guò)不同的反應，分別得到了不同的三萜皂苷類(lèi)化合物，合成途徑見(jiàn)圖2。

白芍為毛茛科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall.的干燥根。有文獻報道白芍的化學(xué)成分主要有單萜及其苷類(lèi)、三萜類(lèi)、黃酮、鞣質(zhì)、多糖、揮發(fā)油等，其中單萜類(lèi)成分芍藥苷含量較高且藥理活性較強。萜類(lèi)成分主要通過(guò)甲戊二羥酸途徑合成，單萜類(lèi)成分經(jīng)甲戊二羥酸（MVA）數步反應轉化成異戊烯焦磷酸（IPP），IPP異構化變成了二甲丙烯焦磷酸（DMAPP），IPP和DMAPP頭尾縮合得到焦磷酸香葉酯（GPP），GPP可反應生成單萜類(lèi)化合物，生物合成途徑見(jiàn)圖3。

枳實(shí)為蕓香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培變種或甜橙Citrus sinensis Osbeck的干燥幼果。枳實(shí)的主要化學(xué)成分為黃酮類(lèi)、生物堿及揮發(fā)油，尤以黃酮類(lèi)成分中的橙皮苷和柚皮苷含量較高，可作為指標性成分進(jìn)行定性定量和提取工藝的研究。黃酮類(lèi)成分由苯丙氨酸經(jīng)苯丙氨酸脫氨酶（PAL）轉化為肉桂酸，再經(jīng)肉桂酸-4-羥化酶（C4H）轉化為對羥基-香豆素，又通過(guò)4-香豆酰-CoA連接酶（4CL）轉化為4-香豆酰輔酶A在查爾酮合成酶（CHS）的作用下生成查爾酮，經(jīng)查爾酮異構酶（CHI）的作用形成二氫黃酮，其他黃酮類(lèi)化合物大都是經(jīng)過(guò)二氫黃酮在各種酶的催化作用下生物合成的，其合成途徑見(jiàn)圖4。

甘草為豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、脹果甘草Glycyrrhiza inflata Bat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根和根莖。研究表明，甘草的化學(xué)成分主要包三萜類(lèi)、黃酮類(lèi)、多糖、香豆素類(lèi)、氨基酸、生物堿類(lèi)、雌激素和有機酸類(lèi)等化合物。三萜類(lèi)和黃酮類(lèi)為其主要有效成分，具有多種藥理作用，尤以甘草酸和甘草次酸含量較高，生理活性較強，較具特征性。三萜皂苷類(lèi)成分生物合成見(jiàn)圖2，黃酮類(lèi)成分生物合成途徑見(jiàn)圖4。

4.3基于成分與藥效關(guān)聯(lián)的四逆散Q-marker預測分析

質(zhì)量控制的根本目的是對中藥有效性的控制，將“藥性”和“藥效”均納入中藥質(zhì)量評價(jià)，才能反映中藥質(zhì)量的完整性。因此，有效性也是中藥質(zhì)量標志物確定的重要依據。藥理學(xué)研究表明，柚皮苷、甘草次酸兩種物質(zhì)是四逆散全方抗炎和免疫抑制藥效的主要效應成分。戈宏焱通過(guò)研究柴胡皂苷對抑郁模型大鼠的作用，發(fā)現柴胡皂苷對大鼠海馬區的神經(jīng)具有保護作用，同時(shí)能提高核糖核酸（BDNF）含量，提示柴胡皂苷的抗抑郁作用是通過(guò)調節腦內神經(jīng)營(yíng)養因子完成的?，F代研究結果表明，柴胡抗抑郁的功效物質(zhì)基礎主要為皂苷類(lèi)成分。還有細胞實(shí)驗發(fā)現芍藥苷與柴胡皂苷a能有效緩解被皮質(zhì)酮損傷的PC12細胞中自噬流被抑制的現象，提高細胞自噬活性，從而提高PC12細胞的活性。枳實(shí)中的化學(xué)成分復雜，其中橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷等黃酮類(lèi)成分均可改善功能性消化不良大鼠的胃排空和小腸推進(jìn)功能，其作用機制可能與增加胃動(dòng)素的分泌有關(guān)。李越峰通過(guò)研究大鼠腦脊液中四逆散的主要活性成分，發(fā)現給予四逆散凍干粉后，大鼠腦脊液中成分峰面積約是空白腦脊液峰面積的12.5倍，血清中四逆散的主要活性成分為辛弗林、芍藥苷、柴胡皂苷c及甘草次酸，均可以使腦脊液中該內源性物質(zhì)峰面積高于空白腦脊液峰面積，初步認定四逆散改善睡眠作用的藥效物質(zhì)基礎是辛弗林、芍藥苷、柴胡皂苷c及甘草次酸混和物。徐甜等對四逆散抗抑郁有效靶點(diǎn)進(jìn)行挖掘，得到抗抑郁靶點(diǎn)對應的藥效組分屬于柴胡的有7個(gè)，枳實(shí)的有12個(gè)，甘草的有87個(gè)，白芍的有1個(gè)。而所得的抗抑郁靶點(diǎn)中，柴胡的靶點(diǎn)有18個(gè)，枳實(shí)的靶點(diǎn)有11個(gè)，甘草的靶點(diǎn)有25個(gè)，白芍的靶點(diǎn)有17個(gè)。此外，侯磊等采用網(wǎng)絡(luò )藥理學(xué)方法對四逆散干預焦慮癥作用機制進(jìn)行探究。結果表明，君藥柴胡中槲皮素、山柰酚等成分具有明顯的抗焦慮作用，其機制與提高小鼠腦內γ-氨基丁酸（GABA）、谷氨酸（Glu）含量有關(guān)；臣藥芍藥中芍藥苷能降低血虛肝郁證模型大鼠環(huán)核苷酸（cGMP）含量，可以改善大鼠的抑郁、焦慮與學(xué)習記憶障礙等；佐藥枳實(shí)中橙皮苷是抗焦慮活性成分之一。上述研究表明柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、芍藥苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、辛弗林和甘草次酸均可作為四逆散的主要藥效成分。

4.4基于復方配伍環(huán)境的四逆散Q-marker的預測分析

配伍是中藥復方的核心，復方通過(guò)配伍針對病或證的主要病理環(huán)節產(chǎn)生治療作用。盧健等以四逆散及不同配伍對潰瘍性結腸炎的干預機制進(jìn)行研究，實(shí)驗結果發(fā)現與模型組相比，四逆散及不同配伍能不同程度地減輕結腸組織的損傷，并能夠促進(jìn)實(shí)驗性潰瘍結腸炎（UC）大鼠結腸病變組織修復。在促進(jìn)結腸組織修復方面，柴胡、芍藥發(fā)揮了君藥與臣藥的的重要配伍作用，甘草作為使藥，其協(xié)調作用主要體現在對胸腺細胞增殖的刺激。李越峰等對四逆散拆方過(guò)程中化學(xué)成分的變化進(jìn)行了分析研究。結果發(fā)現，四逆散中柚皮苷、甘草酸含量高于去柴胡方中的含量；四逆散中芍藥苷溶出量明顯高于單煎物的溶出量；全方煎煮后，枳實(shí)中的柚皮苷、橙皮苷成分溶出量高于單煎物溶出量，且配伍枳實(shí)后四逆散中甘草酸含量明顯升高；配伍甘草后與去掉甘草相比，芍藥苷、橙皮苷、柚皮苷溶出量均有所增多。提示在配伍煎煮過(guò)程中，各成分間存在明顯的相互增溶作用。李軍等采用RP-HPLC法研究四逆散不同配伍對柴胡皂苷a、b2、柴胡總皂苷及甘草素、異甘草素煎出率的影響。結果發(fā)現，四逆散不同配伍中，枳實(shí)中的成分可提高柴胡皂苷類(lèi)成分的煎出量；枳實(shí)、白芍中的成分對甘草素和異甘草素有增溶作用；柴胡中的成分對甘草素和異甘草素有抑溶作用。然而，全方合煎時(shí)各種成分含量均能達到最優(yōu)，這也是四逆散配伍的巧妙之處。據以上分析可知柴胡皂苷a、芍藥苷、柚皮苷、橙皮苷、甘草酸、甘草素可作為四逆散主要藥效成分。