在理論上,β-胡羅卜素幾何圖形同分異構體的評定還可以在其雙重磁共振譜(NMR)上完成。但現階段沒(méi)有參考文獻報導。
β-胡羅卜素同分異構體的電子器件光譜圖特不一樣。順式同分異構體的主消化吸收峰與反式同分異構體的主消化吸收峰對比,其電子器件光譜圖產(chǎn)生“紫移”。與此同時(shí),順式同分異構體在342~348nm處會(huì )發(fā)生一個(gè)特點(diǎn)消化吸收峰。這種光譜儀特點(diǎn)可做為分辨β-胡羅卜素同分異構體的重要環(huán)節。
如上所述,因為分子結構在一個(gè)烴基處發(fā)生了順式對映異構,在β-胡羅卜素的電子器件光譜圖上342~348nm處會(huì )發(fā)生一個(gè)峰(消化吸收段)。這一峰被稱(chēng)作“順式峰”(cis-peak)。分子結構中產(chǎn)生順式對映異構的部位被稱(chēng)作“cis-band”。與此同時(shí),與全反式同分異構體較為,順式同分異構體主消化吸收峰的最高消化吸收光波長(cháng)(λmax)也會(huì )出現輕微的“紫移”。圖3中的I、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ號峰的電子器件光譜圖圖在λmax=342~347nm上下與全反式同分異構體的光譜儀較為能夠見(jiàn)到有顯著(zhù)的峰存有,詳細圖2;圖3為順式峰的絕對高度;與此同時(shí),與Ⅳ號峰的光譜儀較為,I、Ⅱ、Ⅲ號峰光譜儀主消化吸收峰和順式消化吸收峰的λmax;各自發(fā)生了5~6nm和1~4nm的“紫移”,見(jiàn)圖4。這種光譜儀特點(diǎn)的轉變帶來(lái)了將I、Ⅱ、Ⅲ號峰評定為β-胡蘿l、素順式同分異構體的直接證據。
在C30-HPLC上,β-胡羅卜素的幾何圖形同分異構體能夠得到較好的分離出來(lái)。因為對照品試品的貧乏,β-胡羅卜素順式同分異構體的定量分析需根據其電子器件光譜圖范疇內的吸光度指數。揮發(fā)光透射探測器(ELSD)的運用能夠完成這一目地。在ELSD上搜集β-胡羅卜素全反式同分異構體數據信號的情況已由惠伯棣等創(chuàng )建進(jìn)行。應用LC-PDA-ELSD串連系統軟件,同歩搜集每一個(gè)β-胡羅卜素幾何圖形同分異構體成分的電子器件光譜圖和品質(zhì)數據信號,由二者峰總面積之比測算每一個(gè)成分的吸光度指數,最后達到在C30-HPLC-PDA系統軟件上β-胡羅卜素各幾何圖形同分異構體的定量分析檢驗。最后依據其色譜儀峰總面積,能夠精準精確測量出β-胡羅卜素幾何圖形同分異構體的構成。
一般狀況下,用以定性分析的吸光度指數指的是在該有機化合物在λmax處的吸光度指數。β-胡羅卜素全反式同分異構體于450nm處的吸光度指數已被報導,如A1%1cm。一般在2500上下。
不容置疑,在PDA探測器上,一種β-胡羅卜素順式同分異構體的量與其說(shuō)在檢驗光波長(cháng)處的色譜儀峰總面積呈正線(xiàn)性相關(guān)關(guān)聯(lián),合乎朗伯-梅爾斯基本定律。假如在ELSD探測器上,這類(lèi)順式同分異構體的量與其說(shuō)峰總面積間亦存有正線(xiàn)性相關(guān)關(guān)聯(lián),則可重歸其在PDA和ELSD頂峰總面積中間的線(xiàn)性相關(guān)關(guān)聯(lián),并估算其切線(xiàn)斜率。最后,按以下方式估計這類(lèi)順式同分異構體的吸光度指數。
AZ=AE(KZ/KE)
在其中:
AZ=順式同分異構體吸光度指數;
AE=全反式同分異構體吸光度指數;
KZ=順式同分異構體切線(xiàn)斜率=PDA峰總面積/ELSD峰總面積;
KE=全反式同分異構體切線(xiàn)斜率=PDA峰總面積/ELSD峰總面積;
依據朗伯-梅爾斯基本定律,按以下計算公式β-胡羅卜素同分異構體的成分。
x=(A×y)/(A1%1cm×100000)
在其中:
X=試品中常含的b,β-胡羅卜素同分異構體的量(克);
Y=試品溶劑的容積(mL);
A=試品中各成分的峰總面積(毫伏·秒),A1%1cm=吸光度指數,為在1公分光程長(cháng)的色度杯里1%(w/v)濃度值物質(zhì)的量濃度的基礎理論消化吸收值,測算β-胡羅卜素全反式同分異構體成分時(shí)選用數值ε=2500(450nm)。