2.4 PCI2體細胞中的ROS水準及MDA成分

ROS關(guān)鍵來(lái)自損害的膜蛋白，當體細胞內造成過(guò)多的ROS或身體氧化物成分超出體細胞的抗氧化性回復工作能力時(shí)，體細胞便會(huì )造成氧化應激。本實(shí)驗以DCFH-DA做為熒光探針，檢驗2’，7’-二氯熒光素(DCF)的瑩光抗壓強度就可以得知體細胞內ROS的水準。與空缺對照實(shí)驗對比，90μmol/LH202解決PCI2體細胞4h后，體細胞內ROS水準明顯提升(P＜0.01)，做到460.43％(圖4a)，使人體細胞造成明顯的空氣氧化損害；經(jīng)脂溶性提取液預備處理后，可以明顯地抑止PCI2體細胞內ROS的造成(P＜0.01)，在其中2mg/L脂溶性提取液預備處理體細胞8h后，ROS成分為208.37％。光學(xué)顯微鏡觀(guān)查上色后的PCI2體細胞發(fā)覺(jué)，體細胞展現的瑩光抗壓強度轉變與組織細胞內ROS水準趨勢分析一致(圖4b)。因而，脂溶性提取液能夠合理地消除ROS，減輕H202引起的線(xiàn)粒體功能阻礙。
 

當小動(dòng)物或植物細胞造成氧化應激時(shí)，會(huì )產(chǎn)生脂類(lèi)空氣氧化，而MDA是一種生物脂類(lèi)空氣氧化的天然藥物化學(xué)，能夠用于明確脂類(lèi)空氣氧化水準。與空缺對照實(shí)驗對比，90μmol/LH₂0₂解決PCI2體細胞4h后，MDA成分明顯增加(P＜0.01)，做到192.98％(圖5)；經(jīng)脂溶性提取液預備處理8h后，可以明顯地阻攔MDA的造成(P＜0.01)；而一切正常體細胞經(jīng)脂溶性提取液解決后，在無(wú)H₂0₂損害的情形下，其MDA成分可減少至25.71％。

2.5 脂溶性提取液對PCI2細胞壞死的危害

為了更好地進(jìn)一步研究脂溶性提取液能不能合理地抑止細胞壞死，運用AnnexinV-FITC/PI開(kāi)展上色，經(jīng)流式細胞術(shù)檢驗細胞壞死率(圖6a)。如圖所示6b所顯示，與空缺對照實(shí)驗(8.14％)對比，H₂0₂解決明顯提高了細胞壞死率(23.66％)，經(jīng)朝鮮薊脂溶性提取液預備處理后，PCI2體細胞的細胞凋亡獲得明顯抑止。在其中，歷經(jīng)2mg/L脂溶性提取液預維護后，細胞壞死率減少至8.75％。

為了更好地更為直接地較為不一樣解決組的細胞壞死狀況，運用A0-EB對體細胞開(kāi)展上色，根據光學(xué)顯微鏡觀(guān)查體細胞形狀。如圖所示6c所顯示，空缺對照實(shí)驗的體細胞由于吖啶橙(A0)通過(guò)其詳細的細胞質(zhì)置入DNA，基本上所有展現翠綠色瑩光，體細胞形狀一切正常。沒(méi)有顯著(zhù)的細胞凋亡有關(guān)組織學(xué)更改；經(jīng)H202解決的實(shí)體模型組的體細胞發(fā)生了弱化、核凝結等發(fā)翠綠色瑩光的初期細胞凋亡狀況，而且由于溴化乙錠(EB)通過(guò)其受損的細胞質(zhì)置入DNA，展現出橘黃瑩光的末期細胞凋亡狀況：而歷經(jīng)朝鮮薊脂溶性提取液預備處理的PCI2體細胞展現出初期細胞凋亡和末期細胞凋亡體細胞皆有降低的狀況，并展現濃度值依賴(lài)感。

3 結果

本實(shí)驗研究了朝鮮薊副產(chǎn)品中脂溶性提取液對PCI2神經(jīng)元細胞的保障功效。運用GC-MS對朝鮮薊副產(chǎn)品中萜類(lèi)及谷甾醇類(lèi)物質(zhì)開(kāi)展判定與定性分析，結果顯示，關(guān)鍵帶有3種倍半萜內脂，2種谷甾醇及8種五環(huán)三萜。實(shí)驗以H202做為空氣氧化損害誘導劑，研究朝鮮薊副產(chǎn)品脂溶性提取液的身理活力，發(fā)覺(jué)該提取液可減少PCI2神經(jīng)元細胞的空氣氧化損害，而且隨著(zhù)體細胞內LDH露出率、MDA成分及ROS水準的減少。歷經(jīng)AnnexinV-FITC/PI雙染及A0-EB雙染后發(fā)覺(jué)，經(jīng)脂溶性提取液解決的PCI2細胞壞死率明顯減少，與光學(xué)顯微鏡的觀(guān)測結果一致。綜上所述，朝鮮薊副產(chǎn)品脂溶性提取液對PCI2神經(jīng)元細胞具備抗細胞凋亡及防護功效，非常值得進(jìn)一步的綜合利用與科學(xué)研究。