目地

創(chuàng )建鎧甲草中黃酮類(lèi)物質(zhì)和齊墩果酸的含水量測定法。

方式

選用HPC測定方法鎧甲草中齊墩果酸的成分。WatersXBridgePeptideBEHC18（4.6mm×250mm，5μm），流動(dòng)性相為工業(yè)甲醇-PBS（85∶15），流動(dòng)速度1.0mL/min，柱溫35℃，氣相量為10μL，檢驗光波長(cháng)210nm，測量齊墩果酸的成分。結果：齊墩果酸在5～50μg/mL的濃度值范內呈優(yōu)良線(xiàn)性相關(guān)（Y=4533X 909.6，R=0.9996），均值利用率為99.39%，RSD為1.53%（n=6）。

結果

本實(shí)驗方法精確靈巧、平穩靠譜，可用以鎧甲草中齊墩果酸的含水量測量。

鎧甲草（CassiamimosoidesLinn.）為豆科植物（Leguminousae）決明屬一年或多年生長(cháng)亞灌木狀木本植物，以狼把草當藥，關(guān)鍵分散于廣東省、福建省、云南省、中國臺灣、貴州省和廣西省等地，其味甘、性溫，具備清熱去火、化淤化積的作用。有科研結果顯示，鎧甲草可以有效的抑止淀粉酶，避免輕度脂肪肝；其首要成分有黃酮類(lèi)物質(zhì)、齊墩果酸、β-谷甾醇、木犀草素、原兒茶醛等。殊不知，現階段世界各國對鎧甲草的分析主要是聚集在成分和藥用價(jià)值層面，相關(guān)鎧甲草中藥材質(zhì)量管理的探究非常少，且末見(jiàn)對其相關(guān)成分開(kāi)展成分檢測的報導。本試驗以鎧甲草中具備抗感染護肝的相關(guān)成分齊墩果酸，做為定量分析檢驗指標值成份，創(chuàng )建鎧甲草中齊墩果酸的HPLC成分測定法，為鎧甲草的質(zhì)量管理和有效開(kāi)發(fā)設計給予參照根據。

1儀器設備與原材料

WatersAlliance2695型高效率液相色譜；WatersXBridgePeptideBEHC18（4.6mm×250mm，5μm）；WJX-A1000型快速多用途破碎機；JP-100S型超聲波清洗器；MING-CHE24UV超純水機。

齊墩果酸標準品（C1723001）；鎧甲草采于廣東梅州市蕉嶺縣，經(jīng)嘉應學(xué)院醫科院生藥學(xué)翟明教師評定為豆科植物決明屬綠色植物鎧甲草（Cassiamimosoides）的狼把草；別的實(shí)驗試劑均為分析純。

2方式及結果

2.1標準品水溶液的制取

高精密稱(chēng)量齊墩果酸標準品1mg，放置10mL容量瓶中，加工業(yè)甲醇至標尺，即得。

2.2供試品水溶液的制取

稱(chēng)量鎧甲草細粉2g，添加2moL/L的硫酸10mL，充足浸泡后，在60℃水浴下，酸水解反應2h，沉淀用超純水系統水清洗至中性化，干躁后添加10倍量的90%的乙醇溶液和0.5%NaOH水溶液，調整pH值至8，50℃超聲波30min，旋蒸后，水浴加熱濃縮成中藥浸膏。

中藥浸膏用工業(yè)甲醇超聲波融解后，離心式取上清液，滴定劑至10mL，即得。

2.3色譜儀標準

離子交換柱：WatersXBridgePeptideBEHC18（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)性相：工業(yè)甲醇：PBS=85∶15；檢驗光波長(cháng)：210nm；流動(dòng)速度：1.0mL/min；進(jìn)樣量：10μL，柱溫：35℃。

2.4線(xiàn)性相關(guān)調查

各自高精密汲取“2.1”項下的齊墩果酸標準品0.5、1、2、3、4、5mL水溶液于10mL容量瓶中，用工業(yè)甲醇滴定劑，得濃度值為5、10、20、30、40、50μg/mL系列產(chǎn)品濃度值的齊墩果酸標準品水溶液，于“2.3”項下的色譜儀標準，以齊墩果酸標準品水溶液色譜儀峰總面積Y為縱軸，齊墩果酸標準品濃度值X（μg/mL）為橫坐標軸，開(kāi)展線(xiàn)性擬合，得齊墩果酸標曲，求取線(xiàn)性回歸方程Y=4533X 909.6，R=0.9996。結果顯示，在5～50μg/mL的含量范疇內，齊墩果酸標準品水溶液的峰總面積與濃度值的線(xiàn)性相關(guān)優(yōu)良。

2.5專(zhuān)屬性調查

取新項目“2.1”和“2.2”項所制取的標準品水溶液和供試品水溶液，在“2.3”的色譜儀標準下氣相，齊墩果酸的保存期約為13.77min，峰型平穩，分離度優(yōu)良，有不錯的基準線(xiàn)分離出來(lái)，末見(jiàn)殘渣峰影響，具備優(yōu)良的專(zhuān)屬性。如圖所示1所顯示。

2.6儀器設備精度實(shí)驗

高精密汲取標準品水溶液1.0mL，于“2.3”項的色譜儀標準下，持續反復氣相6次，每一次10μL，檢驗獲得黃酮類(lèi)物質(zhì)峰總面積的RSD為1.36%，說(shuō)明儀器設備精度優(yōu)良。

2.7可靠性實(shí)驗

高精密汲取供試品水溶液1.0mL，各自于0、2、4、6、8、12h于“2.3”項色譜儀標準下氣相，檢驗獲得齊墩果酸的峰總面積的RSD為0.82%。說(shuō)明供試品水溶液在12h內平穩。

2.8可重復性實(shí)驗

高精密稱(chēng)量6份等品質(zhì)鎧甲草細粉2.00g，按“2.2”項下的方式平行面制取6份供試品水溶液，于“2.3”項的色譜儀標準，檢驗獲得齊墩果酸峰總面積的RSD為1.47%。說(shuō)明該方式可重復性?xún)?yōu)良。

2.9加樣利用率實(shí)驗

高精密稱(chēng)量已經(jīng)知道成分的等品質(zhì)鎧甲草細粉6份，每一份2.00g，各自高精密添加同一濃度值的齊墩果酸標準品，按以上“2.2”的獲取方式平行面制取成供樣品水溶液，于“2.3”項色譜儀標準下測量，測算獲得均值利用率結果為99.39%，RSD為1.53%。說(shuō)明該方式測定的效果有優(yōu)良精確性。結果見(jiàn)表1。

2.10試品的含量測量

高精密稱(chēng)量3份不一樣批中藥材各2.00g，依照“2.2”項的配制方式制取成供樣品水溶液，每一份試品各自在“2.3”項的色譜儀標準下氣相三次，紀錄峰總面積，測算試品中齊墩果酸的成分。結果見(jiàn)表2。

3探討

在調查齊墩果酸的色譜儀標準時(shí)，曾選用工業(yè)甲醇水，工業(yè)甲醇-0.1%苯甲酸和工業(yè)甲醇-PBS做為流動(dòng)性相，調查數據顯示，當流動(dòng)性相挑選為工業(yè)甲醇-PBS（85∶15）時(shí)，試品中齊墩果酸分離度更強，峰型平穩，無(wú)雜峰影響。因為齊墩果酸與此同時(shí)帶有甲基和羧基官能團，在偏堿情況下容易被獲取，在獲取標準的調查全過(guò)程中，發(fā)覺(jué)添加適量堿溶液使其pH值至8時(shí)，更有利于齊墩果酸成份的獲取。

本研究創(chuàng )建運用高效液相色譜色譜分析測量鎧甲草中齊墩果酸成分的方式 ，方式精度高、可靠性、可重復性、加樣利用率均合乎方法學(xué)認證的規定。測出3批試品中，齊墩果酸的占比在3.67%～3.73%中間，成分較高，且齊墩果酸在臨床醫學(xué)上關(guān)鍵用以養肝降酶，與鎧甲草的作用相符合，表明齊墩果酸合適做為鎧甲草的質(zhì)量檢驗指標值成份，該辦法可做為鎧甲草質(zhì)量管理的方式 ，進(jìn)而為鎧甲草產(chǎn)品質(zhì)量標準的制定給予參照根據。