目地研發(fā)苞米全粉中黃曲霉B1化學(xué)成分分析的國家標準物質(zhì)。方式 選用高效液相色譜色譜法對苞米全粉中黃曲霉B1備選物開(kāi)展均衡性檢測、可靠性調查,選擇8家具有較高檢驗能力的試驗室進(jìn)行好幾家試驗室協(xié)同時(shí)間常數。結果勻稱(chēng)性檢測的方差分析數據顯示F統計分析值<f臨界點(diǎn)?？煽啃詸z測結果剖析表明,備選物中黃曲霉b1未觀(guān)察到多變性。該國家標準物質(zhì)具備優(yōu)良的勻稱(chēng)性,可在常溫下(</f臨界點(diǎn)?？煽啃詸z測結果剖析表明,備選物中黃曲霉b1未觀(guān)察到多變性。該國家標準物質(zhì)具備優(yōu)良的勻稱(chēng)性,可在常溫下(

0前言

黃曲霉B1(aflatoxinB1)是二氫咪唑氧雜萘鄰酮的化合物,帶有一個(gè)雙咪唑環(huán)和一個(gè)氧雜萘鄰酮(香豆素)。黃曲霉B1是給定的化合物中致癌物質(zhì)最強的一種,被世衛組織列入I類(lèi)致癌物質(zhì)。其普遍出現于棉籽油、苞米、花生仁、干果食品類(lèi)和精飼料中,嚴重危害人們及家禽的身心健康,遭受世界各地的普遍關(guān)心。為操縱黃曲霉的傷害,在我國GB2761—2017《食品中真菌毒素限量》要求糧油食品以及成品中黃曲霉B1的限定值,在其中苞米、棒子面及苞米產(chǎn)品限定數值20μg/kg。黃曲霉B1的檢查辦法許多,關(guān)鍵有薄層色譜法、酶聯(lián)免疫法、膠體金試小紙條法、高效液相色譜色譜法和液相色譜儀–質(zhì)譜分析聯(lián)使用方法等。為保證檢驗效果的精確性、穩定性,必須具備溯源性的高準確性的黃曲霉B1基材國家標準物質(zhì)做為日常質(zhì)量控制方法。

近些年伴隨著(zhù)無(wú)損檢測技術(shù)的提升及真菌毒素檢驗量的提升,對檢測結果穩定性和溯源性要求日益提高。國家標準物質(zhì)可用以量值溯源及試驗室品質(zhì)保證工作能力的點(diǎn)評,在試驗室的檢測主題活動(dòng)中激發(fā)著(zhù)關(guān)鍵功效。依據國家標準物質(zhì)數據庫查詢(xún)查找,真菌毒素的有關(guān)國家標準物質(zhì)不管從種類(lèi)上也是從總數上面不能滿(mǎn)足檢驗必須。因而必須進(jìn)行操作系統的真菌毒素類(lèi)國家標準物質(zhì)的研發(fā)工作中,對確保檢驗效果精確穩定性有著(zhù)關(guān)鍵實(shí)際意義。本分析利用對全國各地象征性地區苞米開(kāi)展篩選,挑選合適的苞米備選物,經(jīng)破碎、勻稱(chēng)化技術(shù)性、勻稱(chēng)性和可靠性檢測及好幾家試驗室時(shí)間常數,研發(fā)成苞米全粉中黃曲霉B1基材國家標準物質(zhì),以求能為糧油食品以及成品中黃曲霉B1檢驗質(zhì)量管理、校正檢測儀器、考評工作人員實(shí)際操作能力等給予標準化學(xué)物質(zhì),對在我國糧食作物品質(zhì)安全管理具備關(guān)鍵的實(shí)際意義。

1原材料與方式

1.1儀器設備與實(shí)驗試劑

Agilent1260高效率液相色譜(英國Agilent企業(yè));AutoEVA-60自動(dòng)式濃縮氮吹儀;固相萃取儀(上海安譜試驗科技發(fā)展有限責任公司);GT10-1快速臺式離心機(北京時(shí)代北利離心脫水機有限責任公司);HY-2變速常用震蕩器(常州市國華家用電器有限責任公司)。

工業(yè)甲醇、乙腈(色譜純,法國Merk企業(yè));氧化鈉(分析純,我國醫藥集團有限責任公司);超純水系統(中國香港Waston企業(yè));AflaTest免疫力親和柱(3mL,英國VICAN企業(yè));0.2?mPTFE膜針管過(guò)濾裝置(英國PALL企業(yè));有證國家標準物質(zhì)GBW(E)100302工業(yè)甲醇中黃曲霉B1、苞米全粉空缺(國家糧食和物資儲備局科學(xué)院)。

1.2實(shí)驗方法

1.2.1國家標準物質(zhì)的制取

依據JJF1006—1994《一級標準物質(zhì)技術(shù)規范》規定,從全國各地象征性地區試品挑選出指標值成分符合要求的苞米備選試品,備選試品經(jīng)去雜、破碎、篩粉、混和,用遮光箔袋真空泵封裝,按100g/袋包裝,共包裝500個(gè)模塊,開(kāi)展輻照度解決,(20±5)℃儲存。

1.2.2勻稱(chēng)性檢測

勻稱(chēng)性是標樣的主要特性,用以敘述國家標準物質(zhì)特點(diǎn)的空間結構特點(diǎn)。在國家標準物質(zhì)的研發(fā)(生產(chǎn)制造)全過(guò)程中需要開(kāi)展均衡性評定。勻稱(chēng)性檢測依照JJF1343—2012《標準物質(zhì)定值的通用原則及統計學(xué)原理》技術(shù)標準規定,從早已散裝好的國家標準物質(zhì)中提取15個(gè)模塊開(kāi)展均衡性檢測。檢測方式與時(shí)間常數方式同樣,每袋反復測量3次。

1.2.3可靠性調查

可靠性是標樣的另一個(gè)基本上特性,用以敘述國家標準物質(zhì)的特點(diǎn)值隨時(shí)間變動(dòng)的特性,即敘述國家標準物質(zhì)特點(diǎn)的時(shí)間遍布特點(diǎn)。國家標準物質(zhì)的可靠性包含長(cháng)期性穩定和短期內可靠性2一部分。長(cháng)期性可靠性關(guān)鍵調查存儲情況下的可靠性,本國家標準物質(zhì)存儲于室內溫度(20±5)℃遮光儲存的標準下,各自在第0、1、2、3、6個(gè)月開(kāi)展試驗,每一次選擇兩個(gè)包裝模塊包裝模塊。

短期內可靠性試驗仿真模擬運送全過(guò)程中產(chǎn)生的惡劣自然環(huán)境做好調查,將試樣放置60℃標準下,各自在0、1、3、5、7d開(kāi)展檢測,測定法與時(shí)間常數方式同樣。

1.2.4時(shí)間常數方式科學(xué)研究

國家標準物質(zhì)試品用工業(yè)甲醇獲取,以免疫力親和柱凈化處理聚集,選用液相色譜儀法對苞米全粉中黃曲霉B1開(kāi)展時(shí)間常數。

前解決方式:稱(chēng)量玉米面粉(5g,精準至0.001g)于50mL離心管架中,添加1g氧化鈉,精確添加20mL70%工業(yè)甲醇水,渦流獲取30min,7000r/min離心式5min,取2mL上清液于清潔50mL離心管架中,添加18mL水稀釋液。將以上樣液過(guò)免疫力親和柱,上樣后加10mL水滲濾2次,滲濾后用機械泵排干親和柱,用2mL工業(yè)甲醇過(guò)柱親和柱,機械泵排干后,用N2烘干,用1mL流動(dòng)性相水溶液滴定劑,過(guò)0.22μm濾紙,待上機操作檢驗。

液相色譜儀標準:Agilent1260高效率液相色譜配光化學(xué)反應衍化器;AgilentZORBAXEclipsePlusC18液相色譜儀柱(4.6mm×150mm,5μm),柱溫:40ºC;流動(dòng)性相:A相:乙腈:工業(yè)甲醇(V:V=1:1),B相:水;A:B=35:65(V:V),等梯度方向過(guò)柱;流動(dòng)速度為1.0mL/min,氣相量為50µL;激起光波長(cháng)為360nm,發(fā)送光波長(cháng)為440nm。

1.2.5好幾家試驗室協(xié)同時(shí)間常數

挑選具備我國質(zhì)量認證國家認可委員會(huì )/我國認證認可監管聯(lián)合會(huì )等計量檢定認同的試驗室為合作時(shí)間常數企業(yè)。時(shí)間常數全過(guò)程中采用的實(shí)驗儀器、容積器材都借助了計量檢測或校正。幫助時(shí)間常數企業(yè)應用具備量值溯源的標液制作工作中曲線(xiàn)圖,并且用加標回收開(kāi)展品質(zhì)監管,保證數值的溯源性和精確性。