銀杏樹(shù)做為銀杏樹(shù)科綠色植物唯一活下來(lái)綠化植物，有動(dòng)物活化石之稱(chēng)，其果、葉、根、蜂花粉等均可當藥，在其中銀杏樹(shù)葉的提取液有很高的生物活性和不錯的功效與作用，可作為草本植物膳食補充劑和綠色植物藥品。銀杏樹(shù)葉提取液功效關(guān)鍵聚集在抗氧化性、防癌、釋放壓力、改進(jìn)認知功能（記憶能力和專(zhuān)注力）和血液循環(huán)系統，防止并治療耳鳴、脂肪性肝炎肝損害、糖尿病患者、神經(jīng)系統退行性疾病等。銀杏樹(shù)葉提取液中的生物活性關(guān)鍵得益于黃酮類(lèi)化合物、多糖類(lèi)和三萜類(lèi)，故黃酮類(lèi)化學(xué)物質(zhì)和三萜類(lèi)的成分指標值是分辨銀杏樹(shù)葉提取液品質(zhì)的規范。

銀杏樹(shù)葉以及提取液中黃酮類(lèi)含量檢測方式具體有光度法、近紅外光譜儀法、瑩光分光光度法、液相色譜儀法、液質(zhì)聯(lián)用等，在其中液相色譜儀法具備儀器設備價(jià)錢(qián)較低、實(shí)際操作簡(jiǎn)易、精確性高、方法檢出限劣等優(yōu)勢，在真實(shí)中運用較多。大部分HPLC法測銀杏樹(shù)中黃酮類(lèi)成分時(shí)，先水解反應試品，使當中的化合態(tài)黃酮類(lèi)變化為化合態(tài)黃酮類(lèi)，以測到化合態(tài)和化合態(tài)之和一黃酮類(lèi)物質(zhì)成分，來(lái)判斷其黃酮類(lèi)物質(zhì)品質(zhì)。有很多非法商人運用這一特點(diǎn)，在銀杏樹(shù)葉以及提取液中增加別的含原兒茶醛、山柰酚等較高的化學(xué)物質(zhì)，以實(shí)現有關(guān)規范中有關(guān)銀杏樹(shù)葉提取液黃酮類(lèi)成分指標值規定，假冒偽劣，對銀杏樹(shù)葉提取液的品質(zhì)分辨發(fā)生了一定的影響，因而必須創(chuàng )建一種測量銀杏樹(shù)葉以及提取液中分散黃酮類(lèi)成分的方式 ?，F階段有關(guān)分散黃酮類(lèi)的科學(xué)研究大部分聚集在液質(zhì)聯(lián)用等較珍貴儀器設備，HPLC法科學(xué)研究較少，如蒲擎宇等以工業(yè)甲醇為獲取有機溶劑，檢驗銀杏樹(shù)中原兒茶醛、三奈酚、異鼠李素3種分散黃酮類(lèi)成分，但該方式用時(shí)長(cháng)，加溫流回需6h，有機溶劑耗費大。

文中致力于創(chuàng )建能同測量銀杏樹(shù)葉及提取液中蘆丁、原兒茶醛、山柰酚、異鼠李素4種分散黃酮類(lèi)成分的方式 ，務(wù)求減少現場(chǎng)采樣，減少耗能。與此同時(shí)點(diǎn)評目前市面上銀杏樹(shù)葉提取液中分散黃酮類(lèi)成分水準，剖析原材料及提取液中間相匹配各分散黃酮類(lèi)成分關(guān)聯(lián)，以求更強為公司生產(chǎn)制造給予技術(shù)服務(wù)和服務(wù)項目。

一、原材料與方式

1、原材料與儀器設備

蘆丁、原兒茶醛、山柰酚、異鼠李素標準物質(zhì)，均購于sigma企業(yè)，純凈度分別為96.6％、99.5％、97.0％、95.0％；硫酸銨、工業(yè)甲醇、酒精、超純水系統，在其中工業(yè)甲醇為色譜純，其他均為分析純；銀杏樹(shù)葉3批、銀杏樹(shù)葉提取液3批。Waterse2695高效液相（配置紫外線(xiàn)探測器）；恒溫水浴鍋（配置冷疑流回系統軟件）；超聲清洗器。

2、實(shí)驗方式

（1）規范溶液的配制

各自稱(chēng)量蘆丁、原兒茶醛、山柰酚、異鼠李素標準物質(zhì)6.06mg、4.67mg、6.00mg、1.07mg于50mL容量瓶中，用工業(yè)甲醇超聲波融解后滴定劑，即得0.1212mg/mL蘆丁、0.0934mg/mL原兒茶醛、0.1200mg/mL山柰酚、0.0214mg/mL異鼠李素混和標液。

（2）銀杏樹(shù)供試試品液的制取

銀杏樹(shù)葉：銀杏樹(shù)葉原材料破碎篩粉攪拌后，稱(chēng)量5g試品，100mL工業(yè)甲醇提純再補重，攪拌，過(guò)0.459m有機化學(xué)系濾紙，被測。

銀杏樹(shù)葉提取液：稱(chēng)0.5g提取液于50rIlL容量瓶中，添加小量工業(yè)甲醇超聲波融解，制冷至室內溫度，工業(yè)甲醇滴定劑，攪拌，過(guò)0.459m有機化學(xué)系濾紙，被測。

(3）4種分散黃酮類(lèi)成分的測算

C_樣=S_樣×C_標×V×100/（S_標×m_樣×1000）式中：C_樣為試品中某一成份分散黃酮類(lèi)成分，％；S_樣為試品中相匹配分散黃酮類(lèi)峰總面積；S_標為相匹配標樣峰總面積；m_樣為試品稱(chēng)樣量，g；V為試品液滴定劑容積。

二、結果與剖析

1、色譜儀標準的提升

根據提升進(jìn)樣量（3μL、5μL和10μL）和過(guò)柱程序流程（等度和梯度方向），明確提升后色譜儀標準為：

離子交換柱：AgilentEclipsePlusC18（4.6mm×100mm，3.5μm）柱溫：40⁰C；

進(jìn)樣量：5μL；

流動(dòng)性相：A：0.4％硫酸銨溶液，B：工業(yè)甲醇，梯度方向過(guò)柱程序流程見(jiàn)表1。

提升后的色譜儀標準下銀杏樹(shù)葉提取液的高效液相圖普如圖所示1所顯示。

2、銀杏樹(shù)葉前解決標準提升0.2在其它標準一定的情形下，單要素試驗認證提純方法、提純時(shí)間、提純溫度、流回時(shí)間對提純實(shí)際效果的危害。

（1）提純方法的挑選

稱(chēng)量5g原材料，添加100mL工業(yè)甲醇，選用超聲波提純和加溫流回提純，較為超聲波和流回二種方法提純實(shí)際效果，結果如圖所示2所顯示。由圖2得知，在提純時(shí)間各自為30min、60min、90min時(shí)，加溫流回提純銀杏樹(shù)葉總分散黃酮類(lèi)成分均高過(guò)超聲波流回方法，故銀杏樹(shù)葉提純方法選為加溫流回。

（2）提純時(shí)間的挑選

稱(chēng)量5g原材料，添加100mL工業(yè)甲醇，80℃加溫流回提純銀杏樹(shù)原材料選擇原材料，提純時(shí)間各自為0min、5min、10min、20min、30min、60min、90min，比照結果如圖所示3所顯示。

由圖3得知，流回提純30min時(shí)分散黃酮類(lèi)的結果已保持穩定，增加提純時(shí)間檢驗結果無(wú)顯著(zhù)轉變，故提純時(shí)間當選30min。

根據單要素試驗認證，提升后銀杏樹(shù)葉中分散黃酮類(lèi)前解決標準為工業(yè)甲醇800C加溫流回30min。

3、標曲和線(xiàn)形范疇

對混和標液做2倍梯度方向濃度值稀釋液，所得的蘆丁、原兒茶醛、山柰酚、異鼠李素線(xiàn)性方程、相關(guān)系數r、線(xiàn)性方程見(jiàn)表2。