黑果腺肋花楸別名不老莓、野櫻莓，屬被子植物門(mén)綠色植物。營(yíng)養豐富，果子中含有原花青素、花青素及其黃酮類(lèi)等各種作用成份，具備抗感染、防輻射、降血脂、護肝等作用，與此同時(shí)還能消除人體氧自由基。果子既可生吃，也可以生產(chǎn)加工制做保健飲品、水果汁、水果酒和蘋(píng)果醬等食品類(lèi)，具備健脾胃行氣、養血止咳化痰的功效?，F階段世界各國對黑果腺肋花楸的科學(xué)研究非常少，開(kāi)發(fā)設計和運用其作用成份對日后的科學(xué)研究至關(guān)重要。

花色苷是一類(lèi)普遍出現于綠色植物身體的水溶的黃酮類(lèi)化合物、多糖類(lèi)天然色素，是由原花青素與各種各樣糖原產(chǎn)生的糖苷。其中95％的花色苷中都帶有六種原花青素，即大花天竺葵黑色素、矢車(chē)菊素、飛燕草黑色素、芍藥花黑色素、喇叭花黑色素和錦葵黑色素，根據強堿水解反應可將原花青素轉換成6種普遍花色素中的一種或幾類(lèi)。原花青素具備極強的抗氧化，可以消除人體內的氧自由基，抑止肝脂類(lèi)的過(guò)氧化物狀況，并展現一定的量效關(guān)聯(lián)，可以阻攔臭氧對DNA、蛋白、脂類(lèi)和別的分子伴侶的危害，消除有毒的氧自由基，因而具備防止心腦血管疾病，預防癌癥，減輕糖尿病患者，保護視力等作用，如今早已被使用到食品類(lèi)、藥物、保健產(chǎn)品、護膚品等中?，F階段，并未見(jiàn)有關(guān)黑果腺肋花楸提取液中鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素成分檢測的報導。文中參考有關(guān)參考文獻，供試品水溶液制取選用加溫流回堿化工業(yè)甲醇水解反應法，該加工工藝成熟穩定且簡(jiǎn)易容易實(shí)際操作。選用HPLC測定方法黑果腺肋花楸提取液中鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素的成分，為黑果腺肋花楸果的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)設計運用給予實(shí)驗根據。

一、原材料與方式

1、原材料與實(shí)驗試劑

黑果腺肋花楸提取液(吉林化工學(xué)校有機化學(xué)與制藥業(yè)工程學(xué)校試驗室自做)；鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素(標準品，HPLC≥98％，成都市曼思特生物技術(shù)有限責任公司)；工業(yè)甲醇、硫酸銨(色譜純，天津大茂化學(xué)藥品企業(yè))；水為主純凈水；其他常用實(shí)驗試劑均為國內分析純。

2、儀器設備與機器設備

LC-2000型高效率液相色譜(大連市依利特分析儀有限責任公司)；W5-100SP型恒溫水浴鍋(上海市申生高新科技有限責任公司)；FA-2004N型電子器件電子分析天平(上海精密科學(xué)研究?jì)x有限責任公司)；KQ250DE超聲波清洗器(昆山市超聲波儀器設備有限責任公司)；TU-1950雙光束紫外線(xiàn)由此可見(jiàn)光度計(北京市普析通用儀器設備有限責任公司企業(yè))；T-50溶劑過(guò)濾器(天津實(shí)驗儀器有限責任公司)；RE-52AA無(wú)油真空泵(天津津騰實(shí)驗儀器有限責任公司)。

3、方式

（1）黑果腺肋花楸提取液中鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素的HPLC成分測定法

①色譜儀標準離子交換柱為大連市依利特ODS2C18(4.6ininx250mm，5um)；流動(dòng)性相：A為工業(yè)甲醇，B為0.2％硫酸銨溶液(W)，程序流程為0～30min，40％A；流動(dòng)速度：0.8mL／min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20皿；檢驗光波長(cháng)為276am。

②標準品水溶液的制取高精密稱(chēng)量干躁至恒重的鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素標準品1.80mg，放置50mL的容量瓶中，用2％硫酸工業(yè)甲醇融解并滴定劑至標尺，混勻，配置成濃度值為0.036mg.mL^-1的標準品水溶液，放置電冰箱中遮光儲存預留。

③供試試品溶劑的配制方式

稱(chēng)量干躁至恒重的黑果腺肋花楸提取液1g，放進(jìn)圓底燒瓶中，添加2％的硫酸甲醇溶液30mL，放置90℃水浴中流回1h，制冷至室內溫度，混勻，過(guò)慮，將滲瀝液遷移至50mL容量瓶中并且用2％的硫酸甲醇溶液稀釋液至標尺，混勻，用微孔濾膜(O.22μm)濾過(guò)，取續滲瀝液，做為供試品水溶液。

④流動(dòng)性相的挑選

實(shí)驗中關(guān)鍵考查了工業(yè)甲醇-0.2％硫酸銨溶液、乙腈-0.2％硫酸銨溶液、工業(yè)甲醇-3％苯甲酸溶液等各種各樣流動(dòng)性相對性黑果腺肋花楸提取液中鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素保存期和分離度的危害。

⑤線(xiàn)性相關(guān)調查

汲取鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素的標準品水溶液，配置成濃度值分別為3.6、7.2、14.4、21.6、28.8、36.0μg·／mL的系列產(chǎn)品標準品水溶液，各自氣相20μL，測量鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素的峰總面積。以OD值鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素的峰總面積為縱軸，濃度值C為橫軸制作標曲，得線(xiàn)性回歸方程Y=37486C 3.2127，R=0.9995(n=6)。結果顯示鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素氣相濃度值在3.6～36.0μg·mL^-1范疇內與峰總面積線(xiàn)性相關(guān)優(yōu)良。

⑥可重復性實(shí)驗

取同一批號黑果腺肋花楸提取液6份，稱(chēng)量干躁至恒重的黑果腺肋花楸提取液1g，放進(jìn)圓底燒瓶中，添加2％的硫酸甲醇溶液30mL，放置90℃水浴中流回1h，制冷至室內溫度，混勻，過(guò)慮，將滲瀝液遷移至50mL容量瓶中并且用2％的硫酸甲醇溶液稀釋液至標尺，混勻，用微孔濾膜(O.22μm)濾過(guò)，取續滲瀝液，做為供試品水溶液。各進(jìn)樣量20μL，測量鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素的峰總面積。鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素峰總面積各自為602.18、612.34、616.52、621.13、629.28、613.52，RSD為1.54％，結果顯示成分測定法具備不錯的可重復性。

⑦儀器設備精度實(shí)驗

汲取標準品及供試品水溶液，持續氣相6次，每一次氣相20μL，各自測量標準品及供試品水溶液中鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素的峰總面積。供試品中鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素峰總面積各自為624.23、623.84、631.37、645.85、623.59、611.80，RSD為1.79％。標準品中鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素峰總面積各自為1065.54、1140.96、1122.17、1097.34、1093.65、1138.23，RSD為2.65％，結果顯示儀器設備精度符合規定。

⑧供試品水溶液的可靠性實(shí)驗

汲取供試品水溶液，各自于0、2、4、8、12、24h氣相20μL，測量鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素的峰總面積。供試品中鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素峰總面積各自為617.32、634.17、618.97、630.15、631.22、625.34，RSD為1.09％，說(shuō)明供試品水溶液在常溫下24h內平穩，達到測量規定。

⑨檢出限與定量限實(shí)驗

汲取標準品水溶液適當，逐漸稀釋液，直至檢驗基線(xiàn)噪聲為基線(xiàn)噪聲的3倍才行，測算鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素的最少檢驗濃度值，實(shí)驗結果顯示鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素的最少檢出限為0.360μg／mL。汲取標準品水溶液適當，逐漸稀釋液，直至檢驗基線(xiàn)噪聲為基線(xiàn)噪聲的l0倍才行，測算鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素的定量限，實(shí)驗結果顯示鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素的定量限為0.144μg／mL。

(2)供試品水溶液制取方式的提升

①正交實(shí)驗

依據單要素實(shí)驗結果，基本上精準定位了功效于原花青素水解反應的三個(gè)因素，各自為水解反應溫度、反應速度和酸濃度值。挑選水解反應溫度、反應速度、酸濃度值做為調查要素，按三要素三水準開(kāi)展實(shí)驗，要素水準表見(jiàn)表1。

②工藝驗證性實(shí)驗

稱(chēng)量黑果腺肋花楸提取液3份，每一份0.5g，放進(jìn)圓底燒瓶中，添加3％的硫酸甲醇溶液15mL，放置100℃水浴中流回120min，制冷至室內溫度，混勻，過(guò)慮，將滲瀝液遷移至25mL容量瓶中并且用3％的硫酸甲醇溶液稀釋液至標尺，混勻，用微孔濾膜(0.22μm)濾過(guò)，棄去初滲瀝液，取續滲瀝液做為供試品水溶液。離子交換柱為大連市依利特ODS2C18(4.6inin×250mm，5μm)；流動(dòng)性相：A為工業(yè)甲醇，B為0.2％硫酸銨溶液(V/V)，程序流程為0～30min，40％A；流動(dòng)速度：0.8mL／min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20μL；檢驗光波長(cháng)為276nm。各自氣相20μL，測量鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素的峰總面積，測算鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素的人均成分及RSD值，明確正交實(shí)驗所選定的溶解標準的可靠性。