4、身體之外抗氧化性活力實(shí)驗

（1）對DPPH的清理工作能力

①DPPH溶液的配制氧自由基

高精密稱(chēng)量19.716mgDPPH，用乙醇融解滴定劑于250mL容量瓶中，得C=0.2mmol／L的水溶液，于40℃電冰箱遮光儲存。

②試品溶劑的制取

各自稱(chēng)量烘干的黑果腺肋花楸提取液干中藥浸膏、矢車(chē)菊素、鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素、VC適當，融解而且配置成不一樣濃度值的試品水溶液。各自取不一樣濃度值的試品水溶液2mL于10mL比色管中，按論文參考文獻上述方式實(shí)現實(shí)際操作，在517am處測量OD值A_空缺，A_試品，A_對比。依照計算公式黑果腺肋花楸提取液、矢車(chē)菊素、鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素、VC對DPPH氧自由基的清除率。

DPPH氧自由基清除率／％=(A_空缺一A_試品 A_對比)／A_空缺×100

式中，A_空缺-純凈水替代供試品水溶液與DPPH水溶液反映后的OD值值；A_試品-各供試品水溶液與DPPH水溶液反映后的OD值值；A_對比-各供試品水溶液與工業(yè)乙醇反映后的OD值值。

（2）FRAP測定方法總的抗氧化能力

①FRAP切削液的配置

各自配置0.2mol／L乙酸鈉緩沖溶液(pH=3.6)，10mmol／LTPl億水溶液(溶解40mmol／L硫酸)，20mmol／LFeCl₃水溶液。將以上三者按容積比10:1:1混和。

②FeSO₄標曲的制取

精準稱(chēng)量0.01419FeSO₄，融解并滴定劑至50mL容量瓶中，即得濃度值為lmmol／LFeSO₄水溶液。汲取該水溶液適當，配置成濃度值為2.82、8.46、14.10、19.74、25.38、28.20、33.84μg／mL的水溶液。取各水溶液添加3mLFRAP切削液，攪拌后于37℃反映10min，于593nm處測量OD值，以含量為橫坐標軸，OD值為縱軸，制訂復原力標曲，列舉線(xiàn)性擬合方程式。

③被測物總抗氧化性活力測量

各自稱(chēng)量烘干的黑果腺肋花楸提取液干中藥浸膏、矢車(chē)菊素、鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素、VC適當，融解而且配置成不一樣濃度值的試品水溶液。各自取不一樣濃度值的試品水溶液3mL于10mL比色管中，按論文參考文獻上述方式實(shí)現實(shí)際操作，在593nm處測量OD值值。

(3)鉬酸銨測定方法總的抗氧化能力

①鉬酸銨反映機制的配置各自稱(chēng)量

2.13g倍他米松、0.99g鉬酸銨、6.67mL鹽酸溶解200mL水里，攪拌。

②VC標曲的制取

精準稱(chēng)量0.02599VC，用純凈水融解并滴定劑至50mL容量瓶中，即得濃度值為0.5mg／mL維他命C水溶液。汲取該水溶液適當，配置成濃度值為25、50、75、100、200、250tg／mL的水溶液。汲取O.5mL不一樣含量的水溶液，添加到5mL鉬酸銨反映系統中，反映試管嬰兒于95℃水浴90min。反映液充足制冷至常溫后，于695am處測量OD值，以含量為橫坐標軸，OD值為縱軸，制訂VC抗氧化能力標曲，列舉線(xiàn)性擬合方程式。

③被測物總抗氧化性活力測量各自稱(chēng)量干

燥的黑果腺肋花楸提取液干中藥浸膏、矢車(chē)菊素、鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素適當，融解而且配置成不一樣濃度值的試品水溶液。各自取不一樣濃度值的試品水溶液0.5mL添加到5mL鉬酸銨反映系統中，按論文參考文獻上述方式實(shí)現實(shí)際操作，在695nm處測量OD值值。被測物的總抗氧化能力以等同于是多少濃度值的VC來(lái)表明。

二、結果與剖析

（1）色譜儀標準的挑選

離子交換柱為大連市依利特ODS₂C₁₈(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)性相：A為工業(yè)甲醇，B為0.2％硫酸銨溶液(W)，程序流程為0～30min，40％A；流動(dòng)速度：0.8mL／min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20μL；檢驗光波長(cháng)為276nm。鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素的保存期為24.21min，理論塔板數為21917，與鄰近峰的分離度為2.28。HPLC色譜見(jiàn)圖1。

2、流動(dòng)性相標準的挑選

實(shí)驗結果顯示適合的流動(dòng)性相為工業(yè)甲醇-O.2％硫酸銨溶液(V:V=40:60)，可以將黑果腺肋花楸提取液中的鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素與其它化學(xué)物質(zhì)分離，保存期適度，依照鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素最高值測算理論塔板數為21917，與鄰近峰的分離度為2.28，故挑選在所述流動(dòng)性相標準下完成有關(guān)實(shí)驗。

3、供試品水溶液制取方式的提升實(shí)驗結果

（1）正交實(shí)驗結果

稱(chēng)量黑果腺肋花楸提取液9份，每一份0.5g，放進(jìn)圓底燒瓶中，按正交試驗表開(kāi)展實(shí)驗，結果見(jiàn)表2。

正交實(shí)驗結果顯示：供試品水溶液制取方式的最佳計劃方案為A₃B₃C₂，各要素的危害的大小為：水解反應時(shí)間＞水解反應溫度＞有機溶劑酸濃度值，明確供試品水溶液制取方式的最佳計劃方案為：水解反應溫度為100℃、水解反應時(shí)間為120min、酸濃度值為3％硫酸工業(yè)甲醇溶液。

（2）加工工藝可靠性認證實(shí)驗

三次實(shí)驗結果鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素的峰總面積各自為1379.85、1382.57、1380.43，均值為1380.95，其鈦酸異丙酯矢車(chē)菊素成分各自為1.8660、1.8527、1.8523mg／g，均值為1.8570mg／g，RSD為0.78％，結果顯示，甄選的供試品水溶液制取方式加工工藝相對穩定。