1、運用化肥分子結構的原來(lái)基因合成：運用–化肥分子結構中華有的活力官能團，或經(jīng)適度化學(xué)變化在化肥分子結構上產(chǎn)生-C1、-COCl、-OH、-NH₂、-CHO等活力官能團，隨后再與適度實(shí)驗試劑縮合反應，如碳水化合物與酰鹵或醛基、酸酐與甲基反映等，進(jìn)而生成含適度長(cháng)短“聯(lián)接臂”的化肥半抗原。例如可在偏堿情況下將噻菌靈分子結構中的羥基與溴代己酸縮合反應，生成噻菌靈半抗原。

2、運用生成化肥的化工中間體或化肥的溶解物質(zhì)(或構造類(lèi)似物)生成：如克百威半抗原的生成，先用咪唑酚和光氣反映轉化成2，3-二氫-2，2-二甲基-7-苯并呋哺基氯甲酸酯，隨后再和4-氨基丁酸或6氨基己酸反映獲得維持克百威結構類(lèi)型、具備羧基尾端、含4個(gè)氧原子或6個(gè)氧原子“聯(lián)接臂”的克百威半抗原。

3、從頭合成：如三唑磷半抗原的生成，以三氯硫磷為初始原材料，先與酒精反映轉化成二氯硫代磷酸乙酯，再依次與苯唑醇、氨基己酸(或氨基丁酸)反映獲得三唑磷半抗原N-[(O-乙基-O-苯基-1，2，4-三唑)硫代磷?；鵠-6-氨基己酸(或丁酸)。

(二)化肥人力抗原體(免疫原和被子原)的制取

化肥人力抗原體的制取就是指將化肥半抗原與載體蛋白共價(jià)鍵耦聯(lián)的全過(guò)程。制取人力抗原體時(shí)要充足將化肥的特點(diǎn)構造突顯于載體蛋白表層。依據化肥半抗原中活力官能團的不一樣，可選用不一樣的辦法與載體蛋白共價(jià)鍵耦聯(lián)。針對含活力羧基的化肥半抗原，一般 選用活力酯法、碳二亞胺法或混和酸酐法與載體蛋白的分散羥基產(chǎn)生酰胺鍵而共價(jià)鍵耦聯(lián)。針對含脂環(huán)族伯氨的化肥，一般根據戊二醛、二異氰酸酯、亞胺酸酯等聯(lián)接劑與媒介蛋白共價(jià)鍵耦聯(lián)。針對含脂環(huán)伯胺(脂環(huán)氟苯可先復原為羥基)的化肥，可先反映轉化成重氮鹽，再與載體蛋白分子結構中色氨酸殘基上酚羥基的鄰位產(chǎn)生甲酰胺鍵而共價(jià)鍵耦聯(lián)。針對含甲基、羥基的化肥，可先與琥珀酸酐、氯乙酸鈉反映引進(jìn)分散羧基，再與媒介蛋白耦聯(lián)，針對含糖量基的化學(xué)物質(zhì)，分子結構中的鄰二醇可被過(guò)碘酸鹽空氣氧化為醛基，再與媒介蛋白的分散羥基產(chǎn)生酰胺鍵而共價(jià)鍵耦聯(lián)。在制取人力抗原體時(shí)，用以制取免疫原的載體蛋白和用以制取被子原的載體蛋白一般來(lái)源于不一樣屬種，那樣還可以在化肥免疫力剖析中降低抗原與蛋白的非特異性反映。

(三)抗原的制取與提純

1、多克隆抗體的制取多克隆抗體的制取用人造的免疫原免疫力兔、羊等身心健康小動(dòng)物。

因為病菌、病毒感染等顆粒物性抗原體的抗原性比人力抗原體的抗原性強，因此在使用 人力抗原體免疫力被病菌、病毒感染等病源物或寄生蟲(chóng)病的生物時(shí)，難以獲得對總體目標剖析化肥具非特異感染力的抗原。

小動(dòng)物免疫力計劃方案：初次免疫力以弗氏徹底佐劑乳狀液免疫原使成油包水溶劑，用以皮內多一點(diǎn)注入；加強免疫以弗氏不徹底佐劑乳狀液免疫原使成油包水溶劑，用以皮內或皮下組織多一點(diǎn)注入。免疫力位置包含后背皮內和皮下組織、頭頸皮下組織、腹部、腳板、腹股淋巴結節等。沒(méi)經(jīng)佐劑乳狀液的水溶免疫原，可開(kāi)展皮下注射或靜脈輸液。按免疫力使用量，小動(dòng)物免疫力分少量法、變量定義法和很多法。少量法的免疫原使用量在mg(μg)級，變量定義法多見(jiàn)1～2mg/kg(休重)，很多法的免疫力使用量為50～100mg/kg每只小動(dòng)物；初次免疫力的時(shí)間間隔一般3周上下，之后每過(guò)7～10d加強免疫1次。4免后1周逐漸耳緣靜脈取血，室內溫度當然凝結后4℃置放留宿，分離出來(lái)血清蛋白。將抗血清按1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64……稀釋液，瓊脂粉雙重免疫擴散測定方法抗血清效價(jià)達1∶64時(shí)，頸總動(dòng)脈采全血，室內溫度當然凝結后4℃置放留宿。次日分離出來(lái)血清蛋白，加0.02％疊氮化鈉于一20℃主抓凍存，可儲存3～5年。也可選用硫酸銨三步蛋白質(zhì)變性法分離出來(lái)抗血清中的人免疫球蛋白，必需時(shí)要免疫力蛋白質(zhì)A或免疫力蛋白質(zhì)G脂質(zhì)體、離子交換色譜色譜儀及其二乙胺乙基(DEAE)甲基纖維素吸咐法進(jìn)一步提純，干凍?？乖蓛龇塾?20℃可儲存5～十年。

2、單抗的制取單抗的制取選用雜交瘤技術(shù)性，操作步驟如下所示。

(1)小動(dòng)物免疫力：用提純抗原體對8～12周齡的BALB/c身心健康小白鼠開(kāi)展腹部注入免疫力(水溶抗原體先要用弗氏徹底佐劑充足乳狀液)。一般共免疫力5～8次，免疫力問(wèn)隔時(shí)問(wèn)為2～3周。查驗抗血清的效價(jià)，末次免疫力后3～4d，分離出來(lái)脾體細胞。

(2)骨髓瘤細胞的塑造：取Sp2/0骨髓瘤細胞株，首先用含8-氮鳥(niǎo)嘌呤的培養液做融入塑造，體細胞增長(cháng)時(shí)間一般為10～15h，最大生長(cháng)發(fā)育相對密度為9.0×10⁵個(gè)/mL。在細胞融合前1d，用新鮮培養液調整體細胞濃度值為2.0×10⁵個(gè)/mL，次日一般為多數成長(cháng)期體細胞。

(3)細胞融合：取具備基酶的骨髓瘤細胞和睥體細胞按恰當占比(一般1∶4)混和，添加聚乙二醇(PEG)使體細胞彼此之間結合，隨后用細胞培養液稀釋液以清除聚乙二醇的功效。將結合后的體細胞適度稀釋液后置攝像頭塑造板中塑造。

(4)挑選：細胞培養基至遮蓋l0％～20％塑造板的孔底時(shí)，汲取上清液用間接性酶聯(lián)免疫吸咐測定方法檢驗抗原成分，挑選出抗原成分高的代謝孔。將孔中體細胞再復制化，然后用酶聯(lián)免疫吸咐測定方法開(kāi)展抗原體非特異測量，挑選出代謝特異性抗體的雜交瘤細胞株，液氮罐中凍存。