燕麥粉是麥子制粉操作過(guò)程中的關(guān)鍵副產(chǎn)品，營(yíng)養成分豐富多彩，在其中高含水量的蛋白及其不飽和脂肪讓燕麥粉可做為蛋白質(zhì)補充品與糧油食品產(chǎn)品的夢(mèng)想原材料。但因為燕麥粉中存有基酶的內源性人體脂肪抗霉素、高含水量的抗營(yíng)養成分因素及其高水分活度，促使燕麥粉無(wú)法立即做為食品工業(yè)原材料獲得合理運用，通常被當作精飼料或廢料處理。發(fā) 酵做為改進(jìn)食品類(lèi)物理化學(xué)及生產(chǎn)加工性能的有效的方式 ，在燕麥粉上也獲得了取得成功運用。發(fā)醇后的燕麥粉中的植酸等抗營(yíng)養成分因素的含水量大大減少，淀粉酶和脂質(zhì)空氣氧化酶的活性也獲得明顯抑止?？茖W(xué)研究還發(fā)覺(jué)，燕麥粉中的小分子活性肽、花青素等作用活性物質(zhì)的占比也在進(jìn)行發(fā)酵后明顯提升，具備降低血脂、抗氧化性、抗癌等生理作用]。在其中2,6-二叔丁基對苯醌（2,6-dimethoxy-ρ-benzoquinone，2,6-DMBQ）做為發(fā)醇燕麥粉中首要的抗癌活力成份而遭受普遍關(guān)心。

2,6-DMBQ來(lái)自燕麥粉體細胞內的水溶氫醌糖苷。在進(jìn)行發(fā)酵全過(guò)程中，氫醌糖苷的糖苷鍵受微生物菌種代謝的β-葡萄糖苷酶的功效破裂，并在過(guò)氧化氫酶的效果下轉化成2,6-DMBQ[13]。HIDV魪GI M等[14]在20世際90時(shí)代運用面包酵母發(fā)醇燕麥粉，對發(fā)醇物質(zhì)生產(chǎn)加工后獲得發(fā)醇燕麥粉提取液并定名為Avemar。在之后的分析中，Avemar的抗癌、抗氧化性、增強免疫力的作用獲得普遍確認，但針對Avemar實(shí)際的厭氧發(fā)酵加工工藝與發(fā)酵菌種卻很少有報導。中國專(zhuān)家學(xué)者經(jīng)秀等]和海外專(zhuān)家學(xué)者RIZZELLO C G等[18]各自以酵母和乳酸菌飲料為受試菌苗開(kāi)展產(chǎn)2,6-DMBQ菌苗的挑選，最后得到高溫釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）和綠色植物乳桿
菌（Lactobacillus plantarum）為適宜發(fā)酵菌種，可是事后并沒(méi)有對二種菌苗產(chǎn)2,6-DMBQ的功能開(kāi)展進(jìn)一步較為。

本分析以燕麥粉為原材料，2,6-DMBQ生產(chǎn)量為評價(jià)方法，從3株菌種中挑選最佳發(fā)酵菌種，并調查3種原材料前處理方法對2,6-DMBQ生產(chǎn)量的危害。在這個(gè)基礎上，研究菌苗加上量、料液比、發(fā)酵溫度及其發(fā)酵時(shí)間4個(gè)發(fā)醇加工工藝要素對2,6-DMBQ生產(chǎn)量的危害，并根據單要素實(shí)驗及正交實(shí)驗明確最適宜發(fā)醇加工工藝組成，致力于為發(fā)醇燕麥粉資源進(jìn)一步綜合利用給予實(shí)驗根據。

1 原材料與方式

1.1 原材料與實(shí)驗試劑

1.1.1 原材料

燕麥粉：市面上。

1.1.2 菌苗

乳酸菌（Lactobacillus plantarum）：試驗室分離出來(lái)儲存；高溫釀酒酵母（Saccharomycescerevisiae）、少糖面包酵母：安琪酵母股權有限責任公司。

1.1.3 實(shí)驗試劑

工業(yè)甲醇、氧化鈉（均為分析純）：國藥控股上海試劑有限責任公司；2,6-二叔丁基對苯醌標準物質(zhì)（純凈度>97%）：梯希愛(ài)上海市化為產(chǎn)業(yè)發(fā)展有限責任公司；酵母菌浸取粉胨葡萄糖水（yeast extract peptone dextrose，YEPD）培養液、孟加拉國紅培養液、MRS骨頭湯培養液、MRS固體培養基：廣東環(huán)凱微生物菌種高新科技有限責任公司。

1.2 儀器設備與機器設備

RS-FS1401型多用途破碎機：合肥榮事達小電器有限責任公司；LHS-250HC-11型恒溫恒濕設備恒溫箱：上海一恒儀器設備有限責任公司；BSA 124S型高精密電子分析天平：廣州授科儀器設備高新科技有限責任公司；Avanti J-26xp型離心機：英國B(niǎo)eckman企業(yè)；DHG-9053A型電加熱控溫鼓風(fēng)干燥箱：上海精宏實(shí)驗儀器有限責任公司；KQ-700DE型數控機床超聲波清洗器：昆山市超聲波儀器設備有限責任公司；LDZM-80L-III型滅菌鍋：上海申安醫療器械廠(chǎng)；LGJ-25G冷凍式干燥機：北京四環(huán)福瑞科儀智能科技有限責任公司；M3-L233B微波爐加熱：廣東省美的微波爐生產(chǎn)制造有限責任公司；Waters ACQUITY UPLC H-CLASS超高效率液相色譜儀系統軟件：英國Waters企業(yè)。

1.3 方式

1.3.1 燕麥粉發(fā)醇加工工藝及實(shí)際操作關(guān)鍵點(diǎn)

                                             菌種活化
                                                   ↓
燕麥粉→破碎→殺菌→預備處理→注射→發(fā)醇

實(shí)際操作關(guān)鍵點(diǎn)：

破碎：將小麥胚芽粉碎后，過(guò)60目篩。殺菌：將小麥胚芽粉與超純水系統按質(zhì)量比1∶3充足攪拌后在121 ℃標準下髙壓蒸氣殺菌15 min。預備處理：將滅完菌的燕麥粉與超純水系統依照質(zhì)量比1∶10再度攪拌，依照事后試驗設計開(kāi)展差異解決。菌種活化、注射：將乳酸菌連接MRS骨頭湯，37 ℃標準下塑造24 h，取200 μL細胞培養液連接MRS骨頭湯培養液，37 ℃標準下塑造24 h，持續活性塑造2代后，按事后試驗設計開(kāi)展注射。高溫釀酒酵母和少糖面包酵母在37 ℃溫開(kāi)水中活性10 min后取200 μL連接YEPD培養液，28 ℃標準下塑造24 h，持續活性塑造2代后，按事后試驗設計開(kāi)展注射。發(fā)醇：依照事后試驗設計各自在不一樣標準下完成發(fā)醇。

1.3.2 發(fā)酵菌種的挑選

乳酸菌：用無(wú)菌檢測鹽水將活性后的乳酸菌菌體濃度值調整至1×10⁴ CFU/mL，按菌苗加上量1∶6（菌液與麥胚質(zhì)量比，g∶g）加上到料液之比1∶15（麥胚與水質(zhì)量比，g∶g）的燕麥粉發(fā)醇基液中，37 ℃標準下發(fā)醇24 h。

酵母菌：用無(wú)菌檢測鹽水將活性后的高溫釀酒酵母、少糖面包酵母的菌體濃度值調整至1×10⁴ CFU/mL，按菌苗加上量1∶6各自加上到料液之比1∶15的燕麥粉發(fā)醇基液中，28 ℃標準下發(fā)醇24 h。

 取發(fā)酵物測量2,6-DMBQ生產(chǎn)量，較為3株菌產(chǎn)2,6-DMBQ的工作能力，明確適宜發(fā)酵菌種。

1.3.3 不一樣預備處理方法對2,6-DMBQ生產(chǎn)量的危害

在明確適宜發(fā)酵菌種的根基上，以未作解決的燕麥粉為空白試驗，依據早期預實(shí)驗結果，各自選用高溫（95 ℃，30 min）、微波加熱（700 W，5 min）、超聲波（輸出功率100%，30 min）3種辦法對燕麥粉開(kāi)展預備處理。用無(wú)菌檢測鹽水將活性后的適宜菌苗的菌體濃度值調整至1×104 CFU/mL，按菌苗加上量1∶6加上到料液之比1∶15的燕麥粉發(fā)醇基液中，28 ℃標準下發(fā)醇24 h。測量發(fā)酵物中2,6-DMBQ生產(chǎn)量，以研究不一樣的預備處理標準下是不是有利于2,6-DMBQ生產(chǎn)量的提升，明確適宜預備處理方法。

1.3.4 發(fā)醇標準提升單要素實(shí)驗

在明確適宜發(fā)酵菌種和預備處理方法后完成發(fā)醇標準的科學(xué)研究，固定不動(dòng)發(fā)醇標準為：菌苗加上量1∶6、料液比1∶15、發(fā)酵時(shí)間24 h、發(fā)酵溫度28 ℃，在這個(gè)基礎上，先后調查菌苗加上量（1∶2、1∶4、1∶6、1∶8、1∶10）、料液比（1∶5、1∶10、1∶15、1∶20、 1∶25）、發(fā)酵溫度（18 ℃、23 ℃、28 ℃、33 ℃、38 ℃）、發(fā)酵時(shí)間（18 h、24 h、30 h、36 h、42 h）對2,6-DMBQ生產(chǎn)量的危害，明確
各要素的適宜標準以開(kāi)展正交實(shí)驗。

1.3.5 發(fā)醇標準提升正交實(shí)驗

依據單要素實(shí)驗結果，以2,6-DMBQ生產(chǎn)量為評價(jià)方法，選擇菌苗加上量（A）、料液比（B）、發(fā)酵時(shí)間（C）、發(fā)酵溫度（D）4個(gè)要素開(kāi)展4要素3水準的L（9 34）正交實(shí)驗設計方案，以確認最好發(fā)醇標準組成，正交實(shí)驗要素與水準見(jiàn)表1。

1.3.6 2,6-DMBQ生產(chǎn)量的測量

試品的解決：將發(fā)酵物在8 000×g、4℃標準下離心式15 min，取上清液低溫干燥，隨后添加20 mL工業(yè)甲醇于干凍原材料中開(kāi)展萃取法，超聲波解決（輸出功率100%，30 min）后，用0.22 μm濾紙過(guò)慮制取被測試品液開(kāi)展測量。

參考經(jīng)秀等[17]的辦法實(shí)現了改善，選用超高效率液相色譜儀（ultra performance liquidchromatography，UPLC）測定方法2,6-DMBQ生產(chǎn)量。UPLC標準：ACQUITY UPLC BEH C18色 譜柱（2.1 mm×100 mm1.7 μm），流動(dòng)性相為工業(yè)甲醇∶水=20∶80（V/V），流動(dòng)速度0.2 mL/min，柱溫35 ℃，進(jìn)樣量0.2 μL，檢驗光波長(cháng)
288 nm。以2,6-DMBQ的濃度值（x）為橫坐標軸，峰總面積（y） 為縱軸，制作2,6-DMBQ標曲。2,6-DMBQ標曲的線(xiàn)性回歸方程為y=48 102x-33 772，R²=0.999 4，表明2,6-DMBQ在1～100 μg/mL濃度值范疇內有著(zhù)優(yōu)良的線(xiàn)性相關(guān)，可用以2,6-DMBQ的定量分析。依據2,6-DMBQ標準物質(zhì)的保存期開(kāi)展判定。