（2）黑豆活性多肽抗氧化與酶濃度值的關(guān)聯(lián)

參考于慧等的辦法開(kāi)展DPPH氧自由基清除率的測量。將2mL一定含量的黑豆活性多肽水溶液和2mL的0.12mm01·L^-1DPPH水溶液開(kāi)展混和，遮光于25℃標準下反映30min，取下后于517nm光波長(cháng)下開(kāi)展吸光度值的測量，這時(shí)OD值值紀錄為A_i；將以上全過(guò)程中的2mLDPPH水溶液用工業(yè)乙醇替代，隨后與2mL黑豆活性多肽水溶液開(kāi)展反映，此前提下測量吸光度值紀錄為A_j，將2mL工業(yè)乙醇與2mLDPPH水溶液反映的標準做為空缺組，這時(shí)紀錄吸光度數值Ao。結果如圖2所顯示。

由圖2得知，當酶濃度值小于6％時(shí)，DPPH清除率伴隨著(zhù)酶濃度值的提高而擴大，當酶濃度值超出6％時(shí)，DPPH清除率伴隨著(zhù)酶濃度值的上升而減少?？傮w展現先升高后降低的根本原因取決于伴隨著(zhù)酶濃度值的上升，合理酶濃度值慢慢增加。當底物的濃度值保持不會(huì )改變，合理酶濃度值慢慢增加，進(jìn)而具有抑制效果，使酶水解反應的不完全，故水解反應獲得的抗氧化性肽降低，從而造成 DPPH清除率減少。

（3）黑豆活性多肽抗氧化與pH的關(guān)聯(lián)

本試驗取決于科學(xué)研究酶法對黑豆蛋白質(zhì)水解反應的抗氧化性肽的技術(shù)提升，故以DPPH為指標值，挑選酶解時(shí)間、酶解溫度、酶加上量及其pH為要素開(kāi)展單要素試驗。更改反映pH，結果見(jiàn)3所顯示。
 

由圖中得知，當pH在7.0～9.0時(shí)，DPPH的清除率伴隨著(zhù)pH的擴大慢慢擴大，當pH為9.00時(shí)，DPPH清除率做到最高值，為43.89％。當pH超出9.0時(shí)，DPPH清除率慢慢減少。這是由于胰蛋白酶僅有在一定的pH區段內有著(zhù)較高的活力，當胰蛋白酶處在偏酸或過(guò)堿的情況下時(shí)胰蛋白酶的構造會(huì )被毀壞，造成 一部分蛋白質(zhì)沒(méi)法徹底水解反應，親水性官能團未徹底曝露，促使轉化成肽的抗氧化性涪陛減少。

（4）黑豆活性多肽抗氧化與酶解時(shí)間的關(guān)聯(lián)

根據單要素試驗的結果，能夠挑選出各要素的三個(gè)水準。因此在這個(gè)基礎以上，運用數據分析手機軟件創(chuàng )建4要素3水準的Box—Behnken實(shí)體模型，開(kāi)展回復面可靠性設計。更改酶解時(shí)間結果見(jiàn)4所顯示。

二、結果與探討

1、單要素試驗結果

（1）黑豆活性多肽抗氧化與酶解溫度的關(guān)聯(lián)

將黑豆蛋白質(zhì)配備成一定含量的水溶液，水浴加熱至100℃開(kāi)展15min勻質(zhì)解決。待水溶液降溫至酶解適宜溫度，水浴隔熱保溫，向水溶液中添加0.5mol／L的NaOH調整其pH，酶解一段時(shí)間后100℃水浴消滅10min，室內溫度下離心式(4000r／min，20min)，將上清液干凍后儲存。結果如圖所示l所顯示。

由圖1得知，當酶解溫度小于50℃，DPPH清除率與氣溫正相關(guān)，當氣溫超出50℃時(shí)，DPPH清除率逐漸降低。這是由于胰蛋白酶對平穩的需求較高，溫度過(guò)低會(huì )危害酶解的反應速率，使酶解反映不完全，進(jìn)而危害抗氧化性肽的抗氧化性實(shí)際效果。而氣溫過(guò)高而會(huì )危害胰蛋白酶的活力，使蛋白質(zhì)酶的活性減少，沒(méi)法使蛋白質(zhì)水解反應成具備抗氧化的小分子活性肽段，進(jìn)而使DPPH清除率減少。

（2）黑豆活性多肽抗氧化與酶濃度值的關(guān)聯(lián)

將2mL一定含量的黑豆活性多肽水溶液和2mL的0.12mm01·L^-1DPPH水溶液開(kāi)展混和，遮光于25℃標準下反映30min，取下后于517nm光波長(cháng)下開(kāi)展吸光度值的測量，這時(shí)OD值值紀錄為A_i；將以上全過(guò)程中的2mLDPPH水溶液用沒(méi)有水酒精替代，隨后與2mL黑豆活性多肽水溶液開(kāi)展反映，此前提下測量吸光度值紀錄為A_j，將2mL工業(yè)乙醇與2mLDPPH水溶液反映的標準做為空缺組，這時(shí)紀錄吸光度數值Ao。結果如圖2所顯示。

由圖2得知，當酶濃度值小于6％時(shí)，DPPH清除率伴隨著(zhù)酶濃度值的提高而擴大，當酶濃度值超出6％時(shí)，DPPH清除率伴隨著(zhù)酶濃度值的上升而減少?？傮w展現先升高后降低的根本原因取決于伴隨著(zhù)酶濃度值的上升，合理酶濃度值慢慢增加。當底物的濃度值保持不會(huì )改變，合理酶濃度值慢慢增加，進(jìn)而具有抑制效果，使酶水解反應的不完全，故水解反應獲得的抗氧化性肽降低，從而造成 DPPH清除率減少。

（3）黑豆活性多肽抗氧化與pH的關(guān)聯(lián)

本試驗取決于科學(xué)研究酶法對黑豆蛋白質(zhì)水解反應的抗氧化性肽的技術(shù)提升，故以DPPH為指標值，挑選酶解時(shí)間、酶解溫度、酶加上量及其pH為要素開(kāi)展單要素試驗。

試驗標準開(kāi)展試驗，更改反映pH，結果見(jiàn)3所顯示。

由圖中得知，當pH在7.0～9.0時(shí)，DPPH的清除率伴隨著(zhù)pH的擴大慢慢擴大，當pH為9.00時(shí)，DPPH清除率做到最高值，為43.89％。當pH超出9.0時(shí)，DPPH清除率慢慢減少。這是由于胰蛋白酶僅有在一定的pH區段內有著(zhù)較高的活力，當胰蛋白酶處在偏酸或過(guò)堿的情況下時(shí)胰蛋白酶的構造會(huì )被毀壞，造成 一部分蛋白質(zhì)沒(méi)法徹底水解反應，親水性官能團未徹底曝露，促使轉化成肽的抗氧化性涪陛減少。