（4）黑豆活性多肽抗氧化與酶解時(shí)間的關(guān)聯(lián)

根據單要素試驗的結果，能夠挑選出各要素的三個(gè)水準。因此在這個(gè)基礎以上，運用數據分析手機軟件創(chuàng )建4要素3水準的Box—Behnken實(shí)體模型，開(kāi)展回復面可靠性設計試驗標準開(kāi)展試驗，更改酶解時(shí)間結果見(jiàn)4所顯示。

由圖4得知，當反應速度不超過(guò)2h，DPPH清除率與氣溫正相關(guān)，當響應時(shí)間超出2h，DPPH清除率與溫度反比，在2h時(shí)DPPH清除率做到最高值。當水解反應的時(shí)間段過(guò)短時(shí)間，黑豆蛋白質(zhì)生物大分子沒(méi)有水解反應成具備小分子水生物活性的生物活性肽，因此水解反應物DPPH的清除率較小。而水解反應的時(shí)間段太長(cháng)則會(huì )造成 生物大分子蛋白過(guò)多水解反應成碳水化合物或是是不再具有生物活性短肽鏈的化學(xué)物質(zhì)。

2、應面試驗結果

（1）線(xiàn)性回歸方程實(shí)體模型方差分析

單要素試驗探討了各種要素對黑豆活性多肽抗氧化的危害，為了更好地全方位調查影響因素，仍需明確酶解時(shí)間、酶解溫度、pH、酶濃度值對黑豆抗氧化性肽的耐熱性的危害。故選用再次用回應法對黑豆抗氧化性肽獲取的技術(shù)完成提升。以酶解溫度(X₁)、酶解pH(X₂)、酶濃度值(X₃)、酶解時(shí)間(X₄)為變量，DPPH清除率的響應面試驗結果見(jiàn)表2。溫度(X₁)、酶解pH(X₂)與酶濃度值(X₃)、酶解時(shí)間(X₄)為變量，DPPH清除率為回復值的響應面試驗結果見(jiàn)表2。

依據響應面實(shí)驗方案設計以及試驗結果，必須 創(chuàng )建線(xiàn)性回歸方程實(shí)體模型，用以分辨各要素兩者之間的配對t檢驗是不是明顯，為用以分析和剖析黑豆活性多肽抗氧化的轉變，因此還需分辨其偏差的尺寸。即試驗擬合程度與在最好情況下抗氧化的一致水平。黑豆活性多肽抗氧化的線(xiàn)性回歸方程實(shí)體模型的方差分析如表3所顯示。

由表3得知，該回歸分析P＜O.000l，方程式實(shí)體模型做到極明顯，失擬項P=0.1471＞0.05，不明顯，表明實(shí)體模型創(chuàng )建恰當。該回歸分析的總決策系R²=0.9568，表明方程式擬合程度不錯，試驗偏差小，故該線(xiàn)性回歸方程實(shí)體模型創(chuàng )立，可以用此實(shí)體模型對黑豆活性多肽的抗氧化開(kāi)展解析及預測分析。從而實(shí)體模型獲得的此線(xiàn)性回歸方程為：Y=45.24—6.00X₁ 1.47X₂—1.35X₃ 0.36X₄ 1.81X₁X₂—2.60X₁X₃ 1.06X₁X₄ 0.20X₂X₃一0.17X₂X₄ 0.14X₃X₄—4.98X₁²—0.97X₂²—0.70X₃²—0.90X₄²。

（2）回應斜面結果剖析

響應面圖可反饋出不同要素對黑豆活性多肽抗氧化的危害，依據斜面圖的張口房屋朝向及斜面樣子分辨在試驗范疇內是不是存有最值、各要素兩者之間的相互影響是不是明顯。

融合表3、圖5及圖6可看得出，危害DPPH氧自由基清除率的順序為：溫度(X₁)＞pH(X₂)＞酶濃度值(X₃)>酶解時(shí)間(X₄)，X₁、X₂、X₃、X_1³項做到互極明顯水準(P＜0.01)，X_1²、項做到明顯水準(P＜0.05)。響應面的最佳標準：溫度43.47℃，pH為9.19，酶濃度值為6.51％，水解反應時(shí)間為2.22h，DPPH氧自由基清除率47.14％。

3、認證試驗

為了更好地認證響應面結果的穩定性，依據響應面提升出的最好加工工藝開(kāi)展三次認證試驗。具體取得的黑豆活性多肽DPPH清除率的平均數是47.03％，與剖析值相距0.23％。與響應面估計值比較符合，表明響應面得到的最佳標準具備可行性分析。

三、結果

根據響應面提升試驗剖析出危害黑豆抗氧化性肽的制取要素，這四個(gè)要素對黑豆抗氧化性肽獲取的危害水平次序為：酶解溫度＞pH＞酶濃度值＞酶解時(shí)間。本試驗得到的黑豆抗氧化性加工工藝標準為：酶解溫度43.47℃、pH9.19、酶濃度值6.51％、酶解時(shí)間2.22h，在這里加工工藝標準下取得的黑豆抗氧化性肽對DPPH清除率的平均數為47.03％，與手機軟件得出的標準偏差相距0.23％。本研究對黑豆抗氧化性肽獲取標準完成了提升，且黑豆活性多肽的抗氧化為黑豆活性多肽在抗氧化食品、保健產(chǎn)品等領(lǐng)域的開(kāi)發(fā)設計及藥學(xué)科學(xué)研究帶來(lái)了更加高效的根據。