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農藥殘留的酶活性抑制與免疫分析技術(shù)的免疫分析法(一)

來(lái)源:鄭州天順食品添加劑有限公司 發(fā)布時(shí)間:2021-09-12 10:12:22 關(guān)注: 0 次
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一、免疫力剖析基本

免疫力剖析(immunoassay,LA)是一種以抗原和抗體非特異鑒別與可逆性融合反映為基本的對總體目標剖析物開(kāi)展定性研究和定性分析的技術(shù)性。

與基本物理化學(xué)剖析對比,免疫力剖析具備可選擇性好、敏感度高、剖析容積大、簡(jiǎn)單便捷、低成本、可以信賴(lài)等優(yōu)勢,可大大簡(jiǎn)化乃至省掉試品前處理方式,可檢驗旋光性強、難蒸發(fā)、具備同分異構體的化肥,不用珍貴儀器設備,對應用員工的專(zhuān)業(yè)性技術(shù)標準不高,非常容易推廣和營(yíng)銷(xiāo)推廣。根據免疫化學(xué)科研開(kāi)發(fā)的免疫測定檢測試劑盒和檢測卡,可使用于很多當場(chǎng)試品的快速檢測。

二十世紀90年代至今,化肥、飼料等小分子水化學(xué)物質(zhì)免疫力剖析新技術(shù)的分析和開(kāi)發(fā)進(jìn)展快速,在糧食作物、新鮮水果、蔬菜水果、荼葉、純蜂蜜、肉、蛋、奶等農副食品和水、土壤層等自然環(huán)境試品中化肥、飼料殘余物迅速監管層面起到了關(guān)鍵功效。全球糧食作物與農牧業(yè)機構(FAO)向很多我國強烈推薦免疫力剖析技術(shù)性,美國化學(xué)會(huì )將免疫力剖析、色譜(包含氣象色譜儀和高效率液相色譜儀)一同列入農殘剖析的首要技術(shù)性,免疫測定結果也被納入具備效力的直接證據,變成二十世紀中后期至今科學(xué)研究開(kāi)發(fā)設計和運用的熱門(mén)之一。

(一)抗原體

抗原體(antigen,Ag)是一類(lèi)能誘發(fā)人體免疫系統產(chǎn)生體液免疫,能夠與體液免疫物質(zhì)(抗原或效用體細胞)產(chǎn)生非特異融合的化學(xué)物質(zhì)??乖詮姷幕瘜W(xué)物質(zhì)大部分是構造較繁雜、分子質(zhì)量大、具備臟東西性(抗原體與所刺激性的人體本身化學(xué)物質(zhì)的差異)的化學(xué)物質(zhì)。病源微生物菌種、機構、體細胞、異源蛋白等多具有以上特性,因此全是較好的抗原體??乖w具備抗原性和反映原性二種特性??乖跃褪侵缚乖碳と梭w后,誘發(fā)人體免疫系統產(chǎn)生體液免疫,造成對應抗原或效用體細胞的特異性免疫反映性。反映原性就是指抗原體與體液免疫物質(zhì)抗原產(chǎn)生非特異融合的免疫反應性。

1、抗原體的種類(lèi)抗原體依據起著(zhù)的功能分成徹底抗原體和半抗原,依據來(lái)源于和配制方式又可分成純天然抗原體和人力抗原體,依據其與機身的親緣關(guān)系可分成相同自體抗原體和本身抗原體等。

(1)徹底抗:原徹底抗原體(COF~@ete antigen)通稱(chēng)抗原體,是一類(lèi)不僅有抗原性,又有反映原性的化學(xué)物質(zhì)。大部分蛋白、體細胞、病毒感染、病菌等全是徹底抗原體。

(2)半抗原:半抗原(hapten)就是指具備反映原性,但無(wú)抗原性的化學(xué)物質(zhì),又稱(chēng)之為不徹底抗原體。半抗原分成繁雜半抗原和簡(jiǎn)易半抗原。繁雜半抗原(如大部分構造比較比較復雜的有機物等)不具備抗原性,但具備反映原性。簡(jiǎn)易半抗原(如鏈烷等)既不具備抗原性,又不具備反映原性。

(3)純天然抗原體:純天然抗原體就是指來(lái)源于純天然微生物(如小動(dòng)物、綠色植物、微生物菌種等)的抗原體,這類(lèi)抗原體包含體細胞、機構、蛋白、核苷酸、雜含糖量、病菌、病毒感染等。純天然抗原體一般全是較好的徹底抗原體。

(4)人力抗原體:人力抗原體包含歷經(jīng)人力化學(xué)修飾或更新改造的純天然抗原體、全生成人力抗原體和以生物大分子為媒介的人力抗原體。為了更好地科學(xué)研究抗原性的化學(xué)基礎,可以用已經(jīng)知道有機化學(xué)官能團換置繁雜純天然抗原體表層的特殊官能團獲得人力化學(xué)修飾或更新改造的純天然抗原體,如2,4-二硝基苯(DNP)裝飾蛋白質(zhì)、碘化蛋白質(zhì)等。全生成抗原體多見(jiàn)高分子材料高聚物,如由碳水化合物匯聚成的活性多肽等。相對性分子質(zhì)量低于2 500的小分子水一般不具有抗原性,但可將小分子水化學(xué)物質(zhì)與適度生物大分子的媒介(如蛋白)共價(jià)鍵耦聯(lián)制取人力抗原體,免疫力小動(dòng)物得到對相對應小分子水化學(xué)物質(zhì)具備非特異鑒別功能的抗原。

(5)相同自體抗原體:相同自體抗原體(alloantigen)就是指存有于人、相同小動(dòng)物不一樣個(gè)人(同卵雙生者以外)的抗原性化學(xué)物質(zhì)。當某個(gè)人的體細胞或機構進(jìn)到另一個(gè)體時(shí),可造成體液免疫。人們血漿中的血細胞血形抗原體和白細胞計數抗原體均屬該類(lèi)。

(6)本身抗原體:本身抗原體(autoantigen)就是指造成本身體液免疫的自己機構成份。一般本身機構對人體沒(méi)有抗原性,但在創(chuàng )傷、感柒、電磁波輻射、藥品等干擾下,本身機構能夠產(chǎn)生轉性變成本身抗原體,刺激性人體造成免疫反應。本身抗原體分成隱敝的本身抗原體和裝飾的本身抗原體。

2、危害抗原性的要素

(1)臟東西性:抗原體的有機化學(xué)構成和結構特征差別越大、微生物的屬種和親緣關(guān)系越長(cháng),則抗原性越強。如雞卵清蛋白對禽畜是弱免疫原,而對羊、兔等小動(dòng)物則是強免疫原。

(2)分子大?。嚎乖w分子質(zhì)量越大其抗原性越強。相對性分子質(zhì)量超過(guò)105的蛋白質(zhì)含量是極強的免疫原,相對性分子質(zhì)量低于105的化學(xué)物質(zhì)一般是弱免疫原。Young和Atassi(1986)的研究結果顯示,抗原性規定的最少活性多肽分子結構是由6個(gè)之上DNP磷酸氫鈣構成的寡聚肽。在純天然活性多肽中,現階段已經(jīng)知道可以造成體液免疫的最少分子結構是相對性分子質(zhì)量為3 480的升血糖值素。

(3)有機化學(xué)構成與構造:除分子質(zhì)量外,抗原體的抗原性還在于其有機化學(xué)構成和構造(包含有機化學(xué)官能團和構像)。構造越繁雜的抗原體,其抗原性越強。例如雜含糖量具備抗原性,而甲基纖維素、糖元、長(cháng)鏈乙烷等盡管分子質(zhì)量大,但化學(xué)結構非常簡(jiǎn)單,則不具有抗原性。有一些抗原體對酶、光、熱、氧、化學(xué)藥品等因素比較敏感,有機化學(xué)構成和構造(包含立體式構造)易產(chǎn)生變化,其抗原性也非常容易發(fā)生改變,蛋白質(zhì)水解后抗原性會(huì )大幅度降低。

(4)物理學(xué)情況:顆粒物抗原體(如病毒感染等)比溶解度抗原體的抗原性強,球形蛋白質(zhì)比條狀蛋白質(zhì)抗原性強。

3、化肥人力抗原體:化肥、藥品等小分子水化學(xué)物質(zhì)一般不具備抗原性,但很多化肥、藥品具備反映原性。Landsteiner(1917)在小分子水化學(xué)物質(zhì)免疫力剖析層面開(kāi)展了開(kāi)拓性科學(xué)研究工作中,他將羥基苯磺酸重氮化后與蛋白的色氨酸殘基酚羥基鄰位融合,制取人力徹底抗原體,用該人力抗原體免疫力小動(dòng)物,得到了抗羥基苯磺酸抗原,在這個(gè)基礎上確立了羥基苯磺酸的免疫力統計分析方法。將總體目標剖析化肥以半抗原的方式與分子質(zhì)量大的蛋白共價(jià)鍵耦聯(lián)制取人力抗原體,使化肥分子結構突顯于蛋白表層做為抗原決定簇,以人力抗原體免疫力小動(dòng)物,誘發(fā)人體免疫系統產(chǎn)生體液免疫,造成抗總體目標剖析化肥的特異性抗體,在這個(gè)基礎上創(chuàng )建對該化肥具非特異鑒別功能的免疫力統計分析方法。

實(shí)際上,并不是全部化肥半抗原與媒介蛋白共價(jià)鍵耦聯(lián)后免疫力小動(dòng)物,都能形成抗相對應化肥的特異性抗體。如對酶、光、熱、氧、化學(xué)藥品等因素比較敏感的化肥,在生成半抗原、制取人力抗原體、免疫力小動(dòng)物制取抗原的全過(guò)程中容易產(chǎn)生構造轉變 ,難以獲得對這種化肥具非特異感染力的抗原??乖涂贵w反映一般在水看中開(kāi)展,共價(jià)鍵和靜電引力是維持抗原和抗體感染力的關(guān)鍵相互作用力之一。構造簡(jiǎn)易的網(wǎng)狀結構乙烷,疏水性強,即便 其分子質(zhì)量大,與載體蛋白共價(jià)鍵耦聯(lián)后免疫力小動(dòng)物,也難以獲得抗網(wǎng)狀結構乙烷的抗原。很多具備旋光性官能團、構造較比較復雜的化肥(如替代雜環(huán)化合物、替代芬芳環(huán)類(lèi)化肥,乃至是含三元環(huán)的擬除蟲(chóng)菊酯)半抗原共價(jià)鍵融合在蛋白表層,變成特殊的抗原決定簇,非常容易激話(huà)小動(dòng)物的人體免疫系統,造成對相對應化肥具非特異感染力的抗原。而一些構造簡(jiǎn)易、分子質(zhì)量小的化肥(如甲胺磷),雖有一些免疫化學(xué)科學(xué)研究報導,但迄今并未真真正正得到對甲胺磷具非特異感染力、可以對甲胺磷開(kāi)展高靈敏檢驗的應用性抗原。

(二)抗原

抗原(antihody)是人體免疫系統受抗原刺激后形成的能與抗原體、半抗原產(chǎn)生非特異融合的血蛋白。人免疫球蛋白(immu:nogl()bulin,Ig)一般是一組具備抗原活力和抗原樣構造的蛋白。人免疫球蛋白普遍現象于哺乳動(dòng)物(包含人)的血夜、機構和外分必物中。全部抗原全是人免疫球蛋白,但并不是全部人免疫球蛋白全是抗原,如骨髓瘤蛋白質(zhì)的結構特征與抗原類(lèi)似但無(wú)病毒學(xué)活力,具備免疫力活力的人免疫球蛋白才可以稱(chēng)之為抗原。

參考文獻:農殘剖析,

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