目地：創(chuàng )建超高效液相色譜色譜儀（UPLC）-微生物化學(xué)檢測（BCD）線(xiàn)上聯(lián)用技術(shù)性迅速挑選中藥材中的丁酰乙酰膽堿酯脂酶（BChE）緩聚劑的方式 。方式：應用UPLC-DAD-BCD方式迅速挑選吳茱萸、鉤藤、玄參、山豆根（苗）提取液中的BChE緩聚劑。以蓮芯堿為陽(yáng)性對照，調查UPLC-DAD-BCD方式用以BChE緩聚劑挑選的可行性分析。應用超高效液相色譜-線(xiàn)形正離子阱/電場(chǎng)路軌阱高分辨質(zhì)譜（UHPLC-LTQ/Orbitrap MS）方式評定4種中藥材的70%工業(yè)甲醇提取液中的關(guān)鍵活力成份。結果：UPLC-DAD-BCD方式迅速挑選出12個(gè)BChE緩聚劑，在其中吳茱萸4個(gè)、鉤藤3個(gè)、玄參五個(gè)、山豆根（苗）兩個(gè)，山豆根（苗）中的兩個(gè)活力成份與玄參一共有，根據UHPLC-LTQ/Orbitrap MS評定出這其中的八個(gè)BChE緩聚劑，各自為去氫吳茱萸堿、吳茱萸堿、吳茱萸次堿、1-羥基-2–4(1H)-喹諾酮、去氫毛鉤藤堿、毛鉤藤堿、苦參堿和氧化苦參堿。結果：創(chuàng )建的UPLC-DAD-BCD線(xiàn)上統計分析方法敏感度高、再現性好，能迅速挑選中藥材中的BChE緩聚劑，為中藥材中澳的生物活性成份的迅速挑選給予了一種高效率、方便快捷的研究對策。

老年性癡呆病( Alzheimer’s disease，AD）是以漸行性的記憶力缺失和認知功能障礙為臨床醫學(xué)特點(diǎn)的神經(jīng)系統退行性疾病?，F階段，AD的準確發(fā)病機制并未充分表明。AD 的病發(fā)與演變歷程中，膽堿能系統軟件損傷甚至膽堿( ACh)的降低與認知功能降低立即有關(guān)，因而，堿性磷酸酶緩聚劑常見(jiàn)于A(yíng)D臨床醫學(xué)病人的醫治。

現階段，用以醫學(xué)的堿性磷酸酶緩聚劑多見(jiàn)AChE緩聚劑，頸靜脈不良反應比較大，長(cháng)期性治療效果不理想化。研究表明，在人體內中有2種膽堿核糖核苷酸，即膽堿脂酶（acetylcholinesterase，AChE）和丁酰堿性磷酸酶（butyrylcholinesterase，BChE），正常人人的大腦中具體由AChE新陳代謝膽堿，BChE的成分非常少，而AD病人腦中的狀況剛好反過(guò)來(lái)，AChE活力降低而B(niǎo)ChE活力上升?？茖W(xué)研究表明，BChE緩聚劑不但可以提升膽堿水準，改進(jìn)大白鼠記憶力，且難得少有或沒(méi)有AChE造成的頸靜脈膽堿能不良反應。故與AChE對比，BChE可能是一個(gè)更適合的AD醫治靶標，并在A(yíng)D 中有著(zhù)關(guān)鍵功效。早已發(fā)售用來(lái)醫治AD的藥品大部分全是黃酮類(lèi)成份，吳茱萸、鉤藤、玄參和山豆根（苗）上都含有黃酮，可以用BChE緩聚劑的挑選。

近些年，學(xué)者專(zhuān)注于從天然藥物化學(xué)中找尋副作用小的堿性磷酸酶緩聚劑，已看到的一些活力成份有黃酮類(lèi)、黃酮類(lèi)化合物、多糖類(lèi)、香豆素和萜類(lèi)等，在其中以黃酮為主導。從綠色植物中挑選可選擇性強、副作用小的堿性磷酸酶緩聚劑已變成藥業(yè)行業(yè)分析的網(wǎng)絡(luò )熱點(diǎn)。為了更好地迅速挑選繁雜機質(zhì)中的活性物質(zhì)，各種各樣線(xiàn)上統計分析方法早已被創(chuàng )建并被運用，如：HPLC-UV-DPPH用以生地黃中的抗氧劑的挑選和活力點(diǎn)評，HPLC-UV-AChE方式可快速檢測銀杏提取物于中的AChE緩聚劑，HPLC-BCD方式用以檢驗綠茶葉中的α-葡萄糖苷酶緩聚劑等。

本分析以蓮芯堿為陽(yáng)性對照品，提升儀器設備聯(lián)用系統軟件，創(chuàng )建線(xiàn)上UPLC-DAD-BCD統計分析方法，迅速挑選中藥材中BChE緩聚劑，為中藥材中活性物質(zhì)的迅速挑選給予一種高效率、方便快捷的研究對策。

1 原材料

1.1 儀器設備

超高效率液相色譜UPLC（PDA探測器，英國Waters企業(yè)）；Ultimate 3000 UHPLC（英國Thermo Fisher企業(yè)）；Thermo Scientific LTQ-Orbitrap Elite組合型高分辨質(zhì)譜儀（英國Thermo Fisher企業(yè)）；柱后衍化儀（PCX）（英國Pickering Laboratcries企業(yè)）；Milli-Q 超純水系統凈化設備（英國Millipore公司）；Metter Toledo AL204電子分析天平（上海市速展計量?jì)x器有限責任公司）；臺式一體機快速冷藏型少量離心脫水機（大龍興創(chuàng )實(shí)驗室儀器有限責任公司）；WD-94158型超聲波清洗器（昆山市美美噠超聲波儀器設備有限責任公司）。

1.2 中藥材與實(shí)驗試劑

吳茱萸（貴州省，生產(chǎn)批號1907051）、鉤藤（廣西省，生產(chǎn)批號18120081）、玄參（江蘇省，生產(chǎn)批號B2101009）和山豆根（苗）（廣西省，生產(chǎn)批號181201）中藥材中藥飲片購于湖南長(cháng)沙老百姓大藥房，經(jīng)湖北藥品監督檢測研究所丁曉萍研究者評定分成蕓香科綠色植物吳茱萸Euodia rutaecarpa (Juss.) Benth的干躁果子、茜草科綠色植物鉤藤Uncaria rhynchophylla (Miq.) Miq. ex Havil.的干躁帶鉤莖枝、豆類(lèi)植物玄參Sophora flavescens Ait.的干躁根和豆類(lèi)植物越南地區槐Sophora tonkinensis Gagnep.的干躁根和地下莖。

乙腈、工業(yè)甲醇為色譜純（英國，J.T.Baker）；5,5'-二硫代雙(2-氟苯苯甲醛) (DTNB) (英國Sigam，生產(chǎn)批號 SHBG2823V )、碘化硫代丁酰乙酰膽堿（BTCI）（英國Sigam企業(yè)，生產(chǎn)批號BCBT4812）；BChE（英國Sigam企業(yè)，生產(chǎn)批號SLBP0912V）；牛血清蛋白（英國Sigam企業(yè)，生產(chǎn)批號 SLBL2616V）；超純水系統（Milli-Q超純水系統提純系統軟件自做）；工業(yè)甲醇、三羥基羥基甲烷氣體（Tris）等實(shí)驗試劑均為分析純（國藥控股化學(xué)藥品有限責任公司）。蓮芯堿（我國食品藥品安全評定研究所，生產(chǎn)批號111696-201703）。

2 方式

2.1 試品溶劑的制取

各自高精密稱(chēng)量吳茱萸、鉤藤、玄參、山豆根（苗）粉末狀4 g，于具塞錐形瓶中，高精密添加25 mL 70%工業(yè)甲醇，稱(chēng)取凈重，超聲波（輸出功率350 W，頻率35 kHz）30 min，再稱(chēng)取凈重，用70%工業(yè)甲醇補充損害的凈重，混勻過(guò)慮，取續滲瀝液，用0.22 μm微孔濾膜濾過(guò)，預留。

高精密稱(chēng)量蓮芯堿高氯酸鹽，用色譜儀工業(yè)甲醇制取成含量為0.06，0.12，0.24，0.36，0.60，1.20和1.80 mg·mL-1的水溶液，立即氣相。

2.2 BChE水溶液和栽培基質(zhì)水溶液的制取

用0.1 moL·L-1 0.1%牛血清蛋白的Tris-HCl緩沖溶液（pH 8.0）制取0.3 U·mL-1的BChE水溶液；高精密稱(chēng)量DTNB粉末狀適當，用Tris-HCl緩沖溶液（0.1 moL·L-1、pH 8.0）制取成1.5×10-3 moL·L-1的水溶液；高精密稱(chēng)量BTCI粉末狀適當，用Tris-HCl緩沖溶液（0.1 moL·L-1、pH 8.0）制取成3×10-3 moL·L-1的水溶液。