植酸是一種主要的甲基對硫磷純天然抗氧劑，普遍出現于谷物和植物的種子中。植酸做為抗氧劑的應用性科學(xué)研究報導愈來(lái)愈多。Munoz等科學(xué)研究報導純天然的磷化合物植酸，可做為尿石癥的潛在性緩聚劑。Lv等研究發(fā)現植酸在帕金森醫治中發(fā)揮一定的功效，明顯抑止MPTP誘發(fā)的黑質(zhì)（SN）膽堿能體細胞損害，抑止小膠質(zhì)細胞激話(huà)和誘導型一氧化氮合酶（iNOS）。Thompson等科學(xué)研究證明了加上內源性植酸對緩解木薯淀粉吸收率和對豆類(lèi)植物的血糖值反應能力有影響?？箟难岫罐⑺狨ナ且环N根據化學(xué)物質(zhì)生成的被國家行業(yè)標準限制的抗氧劑，已被藥物管理處（FDA）建議做為英國安全性食品類(lèi)和純天然二級食品類(lèi)抗氧劑?？箟难岫罐⑺狨ゾ邆淇寡趸曰盍?，在食品行業(yè)中使用普遍，其呈現出生物活性，可用以治療腫瘤等各種病癥。Fathi等運用表層低溫等離子共震技術(shù)性科學(xué)研究牛血清蛋白與抗壞血酸豆蔻酸酯中間的相互影響，發(fā)覺(jué)他們相互之間的融合會(huì )危害蛋白質(zhì)的構像，進(jìn)而很有可能影響生物活性分子結構在身體的運送和遍布。Zhou等研究發(fā)現抗壞血酸豆蔻酸酯可用以協(xié)作抗癌醫治。

糖尿病患者是一種隨著(zhù)新陳代謝和內分泌失調的重疾。大部分糖尿病人遭受高胰島素血癥和胰島素分泌缺點(diǎn)的2型糖尿?。═2DM）的危害，并發(fā)生多種病發(fā)癥，包含大毛細血管和毛細血管功能問(wèn)題等。一般醫治T2DM的對策是飲食搭配操縱，適當健身運動(dòng)，應用降血脂和降血脂劑等。抑止α-葡萄糖苷酶是治療糖尿病的技術(shù)手段之一，合理抑止α-葡萄糖苷酶的活力可緩解飯后血糖水準的提升 。Kunyanga等研究表明植酸成分高的綠色植物可高效遏制食品類(lèi)試品中α-葡萄糖苷酶的活力，其抑止水平與植酸成分立即有關(guān)，而植酸成分很有可能對飯后血糖水準的潛在性醫治有協(xié)同效應。殊不知，植酸和L抗壞血酸豆蔻酸酯2種抗氧劑對α-葡萄糖苷酶的抑止原理末見(jiàn)報導。本分析根據酶動(dòng)力學(xué)模型與分子對接技術(shù)性科學(xué)研究植酸和L-抗壞血酸豆蔻酸酯對α-葡萄糖苷酶的抑制效果，為這2種抗氧劑多功能性科學(xué)研究給予新理念，與此同時(shí)為研發(fā)新式酶抑制劑用以治療糖尿病給予理論基礎。

1 原材料與機器設備

釀酒酵母的α-葡糖苷酶（EC3.2.1.20），英國Singma-Aidrich企業(yè)；阿卡波糖，上海市麥克萊恩生物化學(xué)高新科技有限責任公司；對磺酰氯基-α-D-吡喃葡萄糖水苷（pNPG）、對磺酰氯（pNP），北京市百靈威高新科技有限責任公司；無(wú)水碳酸鈉（Na₂CO₃），國藥控股化學(xué)藥品有限責任公司；植酸、L-抗壞血酸豆蔻酸酯，上季風(fēng)水田農業(yè)廣生物技術(shù)有限責任公司；實(shí)驗自來(lái)水為超純水系統。
SynergyH1多功能酶標識儀器設備，英國B(niǎo)ioTek儀器設備有限責任公司；HWS-24電加熱恒溫水浴槽，上海市恒世儀器設備有限責任公司。

2 實(shí)驗方式

2.1 植酸和L-抗壞血酸豆蔻酸酯對α-葡糖苷酶的控制實(shí)際效果

α-葡萄糖苷酶能使pNPG水解轉化成pNP，反應物在紫外線(xiàn)消化吸收光波長(cháng)405nm處具備較大消化吸收值?；瘜W(xué)物質(zhì)對α-葡萄糖苷酶的控制實(shí)際效果測定法依據論文參考文獻進(jìn)一步改動(dòng)。α-葡萄糖苷酶的測活總管理體系為340μL，最先添加133μL0.1mol/L聚磷酸鹽緩沖溶液（磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉混和配置而成，pH6.8），添加10μL5U/mLα-葡萄糖苷酶封閉液，接著(zhù)添加7μL不一樣濃度梯度的效用物水溶液，混和勻稱(chēng)后在37℃下孵育10min。添加20μL5mmol/L底物pNPG水溶液，混和勻稱(chēng)后在37℃下孵育20min。170μL0.1mol/LNa2CO3停止反映。取200μL溶液于96孔板中，選用SynergyH1多功能酶標識儀器設備在405nm光波長(cháng)處測得消化吸收值。

被測效用物為植酸和L-抗壞血酸豆蔻酸酯，植酸濃度值先后為0.15，0.16，0.17，0.18，0.19，0.20，0.205，0.21，0.215，0.220，0.230mol/L，L-抗壞血酸豆蔻酸酯濃度值先后為0，0.05，0.1，0.15，0.2，0.25，0.3，0.35，0.4，0.45，0.5，0.55，0.6mmol/L，每一個(gè)梯度方向下平行測定5次，獲得不一樣效用物濃度值下最終反映機制的消化吸收值。以α-葡萄糖苷酶剩下酶活的抑制率減少至50%時(shí)效用物的含量為即是ＩC50值。將沒(méi)有效用物的反映做為空白試驗組。

2.2 植酸和L-抗壞血酸豆蔻酸酯對α-葡糖苷酶的抑止原理

的抑止原理被測效用物為植酸和L-抗壞血酸豆蔻酸酯，效用物對α-葡萄糖苷酶抑止原理的探討是根據抑止作用的測定法。α-葡萄糖苷酶的濃度梯度為5，4，3，2，1U/mL，底物pNPG濃度值為5mmol/L，測量效用物在差異濃度值下反映機制的紫外線(xiàn)消化吸收光波長(cháng)。以酶的濃度梯度為橫坐標軸，管理體系的反應速率為縱軸制作原理圖，根據圖上曲線(xiàn)圖是不是過(guò)起點(diǎn)來(lái)判斷效用物對α-葡萄糖苷酶的抑止原理。

2.3 植酸和L-抗壞血酸豆蔻酸酯對α-葡糖苷酶的抑止種類(lèi)

被測效用物為植酸和L-抗壞血酸豆蔻酸酯，效用物對α-葡萄糖苷酶抑止種類(lèi)的探討是根據抑止作用的測定法。α-葡萄糖苷酶的含量為5U/mL，底物pNPG的濃度梯度為5，3.9，2.8，1.7，1.1mmol/L，測量效用物在差異濃度值下反映機制的紫外線(xiàn)消化吸收光波長(cháng)。以pNPG濃度梯度的最后為橫坐標軸，管理體系的反應速率的最后為縱軸制作Lineweaver-Burk類(lèi)型圖，圖上曲線(xiàn)圖的相交點(diǎn)部位判斷效用物對α-葡萄糖苷酶的抑止種類(lèi)。根據二次作Dixon圖，測算抑止參量。

2.4 分子對接技術(shù)性

分子對接技術(shù)性能夠進(jìn)一步探尋效用物與α葡萄糖苷酶的融合方式。PubChem中免費下載植酸和L-抗壞血酸棕櫚樹(shù)豆蔻酸酯的2D構造儲存為SDF文件格式。根據Chem3DPro手機軟件開(kāi)展轉換為3D構造儲存為mol2文件格式。UniProt蛋白資源文本檢索釀酒酵母α-葡糖苷酶的一級編碼序列，瀏覽編碼為P53341。挑選與靶點(diǎn)具備72.4%編碼序列同一性的釀酒酵母異麥牙糖酶（PDB編號3AＪ7，1.38Å屏幕分辨率）的分子結構做為模型模版。應用MolecularOperatingEnvironment（MOE）同宗搭建模型工具搭建釀酒酵母α-葡糖苷酶的3D構造。將酶蛋白和效用物動(dòng)能降到最低至0.05RMS梯度方向有利于二者連接。搭建的配位化學(xué)物質(zhì)和酶蛋白導進(jìn)MOE手機軟件中同一對話(huà)框，根據Simulationdock將酶和配位開(kāi)展半軟性連接。針對每一個(gè)配位，配位分子結構根據姿態(tài)的扭曲產(chǎn)生多種多樣構像，盡量平穩的構像與酶促反應袋子融合。挑選出最好是配位構像與酶蛋白活力結構域氨基酸殘基的融合方式和相互影響，并應用數據分析工具PyMol程序流程表明二者相結合的三維圖像。

2.5 數據處理方法

應用SPSSStatistics17.0手機軟件開(kāi)展數據分析，應用OriginPro8.5手機軟件制作圖型與剖析。應用Chem3DPro手機軟件轉換3D構造，應用MolecularOperatingEnvironment（MOE）手機軟件開(kāi)展分子對接，應用PyMol手機軟件觀(guān)查連接結果的融合方式。全部數據信息值均表明為“均值±標準誤差”。

3 結果與剖析

3.1 效用物對α-葡萄糖苷酶的抑制效果

植酸和L-抗壞血酸豆蔻酸酯對α-葡萄糖苷酶均有控制實(shí)際效果。效用物對酶的比較剩下酶活的抑制率伴隨著(zhù)效用物含量的提高而減少，當植酸濃度值做到0.195mol/L時(shí)，抑制率減少為71%，當抑制率減少到50%時(shí)，植酸的濃度值（ＩC50）為（0.207±3.137）mol/L。L-抗壞血酸豆蔻酸酯對α-葡萄糖苷酶抑止酶活做到50%時(shí)，濃度值為（0.39±0.00838）mmol/L。就ＩC50來(lái)講，L-抗壞血酸豆蔻酸酯對α葡萄糖苷酶的控制實(shí)際效果好于植酸?？赡苁且驗長(cháng)抗壞血酸豆蔻酸酯頭頂部含有酚羥基的苯基更易于與α-葡萄糖苷酶融合。阿卡波糖對α-葡萄糖苷酶過(guò)半數抑制率ＩC50為658mmol/L，植酸的控制實(shí)際效果沒(méi)有阿卡波糖的效果非常的好，殊不知L-抗壞血酸豆蔻酸酯的控制實(shí)際效果是阿卡波糖的上萬(wàn)倍。