目地 創(chuàng )建黃蛭益腎膠襄HPLC指紋識別圖普，選用指紋圖譜并融合有機化學(xué)計算機視覺(jué)技術(shù)性對黃蛭益腎膠襄開(kāi)展質(zhì)量管理。方式 選用Waters XBridge®Shield RP18(250 mm×4.6 mm,5μm)離子交換柱，以乙腈-0.05%硫酸銨溶液為流動(dòng)性相，梯度方向過(guò)柱，容積總流量1.0 mL/min，柱溫30℃，檢驗光波長(cháng)210 nm。選用HPLC串連四極桿航行時(shí)間質(zhì)譜分析（HPLC-Q-TOF-MS/MS）對一共有峰定性研究，選用聚類(lèi)（HCA）、主成分分析法（PCA）及偏最小二乘法-判別分析（PLS-DA）數據分析。結果 16批試品中國共產(chǎn)黨校準24個(gè)一共有峰，相似性點(diǎn)評均超過(guò)0.9，評定了在其中24個(gè)峰并屬于7種藥；HCA及PCA鑒別方法將試品分成3類(lèi)；PLS-DA挑選出包含黃芩異黃烷苷、人參皂甙Rg1、毛蕊大豆異黃酮葡萄糖水苷、7,2'-二甲基-3',4'-二叔丁基異黃烷、松香醇二葡萄糖水苷、毛蕊大豆異黃酮、芒柄花黃素、綠原酸以?xún)鹊?種關(guān)鍵差別成份。結果 創(chuàng )建的HPLC指紋圖譜可較大水平體現黃蛭益腎膠襄的藥味構成信息內容，較全方位體現其品質(zhì)，運用的點(diǎn)評剖析技術(shù)性可有效點(diǎn)評其品質(zhì)差別并精確找尋出差別成份，為其品質(zhì)有效調節和規范健全帶來(lái)根據。

黃蛭益腎膠襄由黃芩、水蛭、枸杞、川牛膝、鹽車(chē)前子、淮山藥、薏米仁、沙參、墨旱蓮、菟絲子、三七、益母草顆粒、北沙參、蟬蛻、紫河車(chē)15味中藥材構成，依據知名腎炎學(xué)者鄒云翔專(zhuān)家教授獨創(chuàng )性的經(jīng)歷方特制而成，作用補氣血滋陰、健脾胃益腎、化淤利濕，用以輕、輕中度漫性繼發(fā)性通用型慢性腎炎的氣陰兩虛或兼具氣滯血瘀，水液證者。黃蛭益腎膠襄藥味諸多，特性各不相同，成分繁雜，該中藥制劑現階段的分析關(guān)鍵在醫學(xué)運用層面，欠缺對其質(zhì)量管理層面的科學(xué)研究?，F行標準產(chǎn)品質(zhì)量標準內容簡(jiǎn)易，質(zhì)量管理不全方位，方式也比較落伍，定量分析指標值單一，不可以表現黃蛭益腎膠襄的總體有機化學(xué)構成，無(wú)法對藥物開(kāi)展全方位的質(zhì)量管理，那樣必然危害臨床用藥的實(shí)效性。

中藥材指紋圖譜的特性包含全面性、特征及可細化等層面，突顯中藥材的詳細外貌，在科學(xué)研究中藥材相關(guān)成分、操縱中藥材品質(zhì)及其辨別層面的功能更加突顯。有機化學(xué)計算機視覺(jué)技術(shù)性可將指紋圖譜信息內容功效系數法，客觀(guān)性體現中藥材品質(zhì)信息內容，包含聚類(lèi)（HCA）、主成分分析法（PCA）、判別分析（DA）和神經(jīng)網(wǎng)絡(luò )技術(shù)性（ANN）等，是一種合理點(diǎn)評中藥材品質(zhì)的方式 。中藥材指紋圖譜融合有機化學(xué)計算機視覺(jué)，是中藥材真假辨別、品質(zhì)評估的強有力方式，早已普遍使用于中草藥及中藥制劑的質(zhì)量管理層面。本科學(xué)研究初次選用HPLC創(chuàng )建黃蛭益腎膠襄的指紋圖譜，運用HPLC-Q-TOF-MS/MS對其一共有成份開(kāi)展定性研究，并融合HCA、PCA、和PLS-DA對其實(shí)現品質(zhì)評估并發(fā)覺(jué)導致不一樣批號間品質(zhì)不同的要素，為黃蛭益腎膠襄質(zhì)量管理和健全產(chǎn)品質(zhì)量標準打下基礎。

1 原材料

高效率液相色譜Ulti Mate3000（英國賽默飛世爾高新科技有限責任公司）；Agilent 1290高效率液相色譜（英國安捷倫公司）；Bruker四級桿航行時(shí)間質(zhì)譜儀器（法國布魯克企業(yè)）；XSE105型電子分析天平（法國梅特勒-托利多企業(yè)）；Thermo Heraeus Multifuge X3離心脫水機（英國賽默飛世爾高新科技有限責任公司）；KUDOS超聲波清洗器（上海市科導超聲波儀器設備有限責任公司）；Milli-Q®型超純水儀（英國密理博企業(yè)）。

標準品：松香醇二葡萄糖水苷（生產(chǎn)批號111537-20160501，質(zhì)量濃度≥91.7%），購自我國食品藥品安全檢驗研究所；7,2'-二甲基-3',4'-二叔丁基異黃烷（生產(chǎn)批號Y28M10H84303，質(zhì)量濃度≥98%）、黃芩異黃烷苷（生產(chǎn)批號Y08S8H43409，質(zhì)量濃度≥98%）、美迪紫檀木苷（生產(chǎn)批號P21N9F75533，質(zhì)量濃度≥98%）、毛蕊大豆異黃酮葡萄糖水苷（生產(chǎn)批號Y27F9H54731，質(zhì)量濃度≥98%）、芒柄花苷（生產(chǎn)批號R28O8F46957，質(zhì)量濃度≥98%）、毛蕊大豆異黃酮（生產(chǎn)批號Y24N9Y75652，質(zhì)量濃度≥98%），均購自上海源葉生物技術(shù)有限責任公司；芒柄花黃素（生產(chǎn)批號MUST-18033005，質(zhì)量濃度≥99.03%），購自成都市曼斯特生物技術(shù)有限責任公司。工業(yè)甲醇、乙腈、苯甲酸為色譜純；硫酸銨為分析純；水為超純水系統。

黃蛭益腎膠襄16批試品、藥方中每種藥的原中藥材（經(jīng)蘇州藥物產(chǎn)品質(zhì)量檢測研究所閔春艷負責人中藥師評定達標）、缺單種藥的黃蛭益腎膠襄呈陰性試品均由蘇州雷允上醫藥有限責任公司給予。16批試品序號S1～S16，相對應生產(chǎn)批號各自為OC26002、PC26002、QC26001、RC26003、RC26004、RC26005、RC26006、RC26007、RC26008、RC26009、RC26010、RC26011、SC26001、SC26005、SC26006、SC26007。

2 方式

2.1 色譜儀標準

以Waters XBridge®Shield RP18(250 mm×4.6 mm,5μm）為離子交換柱；流動(dòng)性相為乙腈（A)-0.05%硫酸銨水（B）；梯度方向過(guò)柱程序流程：0～5 min、5%A,5～85 min、5%～45%A；容積總流量1.0 mL/min；柱溫30℃；氣相容積10μL；檢驗光波長(cháng)210 nm。

2.2 質(zhì)譜分析標準

選用電噴霧器離子源（ESI），正、空氣負離子逐行掃描，掃描儀范疇m/z 50～1 500，干躁氣溫度180℃，空氣干燥器容積總流量6 L/min，電子煙霧化器工作壓力150 k Pa，毛細血管工作電壓4.5 k V，裂化工作電壓500 V，撞擊動(dòng)能35.0 e V。

2.3 水溶液的制取

2.3.1 供試品水溶液的制取

高精密稱(chēng)取本產(chǎn)品粉末狀約2 g，置具塞錐形瓶中，加工業(yè)甲醇20 m L，超聲波解決（輸出功率100 W，頻率52 k Hz)30 min，取下，放冷，上清液過(guò)0.45μm的濾紙，取續滲瀝液，即得。

2.3.2 標準品水溶液的制取

取松香醇二葡萄糖水苷、7,2'-二甲基-3',4'-二叔丁基異黃烷、黃芩異黃烷苷、美迪紫檀木苷、毛蕊大豆異黃酮葡萄糖水苷、芒柄花苷、毛蕊大豆異黃酮、芒柄花黃素適當，高精密稱(chēng)取，加工業(yè)甲醇做成濃度值分別為18.00、8.40、21.20、8.40、20.08、15.94、29.28、16.92 mg/L的混和標準品水溶液。

2.3.3 中藥材水溶液的制取

取黃芩、水蛭、枸杞、川牛膝、鹽車(chē)前子、淮山藥、薏米仁、沙參、墨旱蓮、菟絲子、三七、益母草顆粒、北沙參、蟬蛻、紫河車(chē)各2 g，同“2.3.1”項下方式制取簽單種藥供試品水溶液。

2.3.4 缺單種藥的呈陰性試品溶劑的制取

各自取缺單味藥的呈陰性試品2 g，同“2.3.1”項下方式制作成呈陰性試品水溶液。

2.4 方法學(xué)調查

2.4.1 精度實(shí)驗

按“2.3.1”項下邊法紀得供樣品水溶液（S1），按“2.1”項下色譜儀標準，持續氣相6次測量。以16號峰毛蕊大豆異黃酮為參考峰，測算各一共有峰的相對性保存期和相對性峰總面積RSD<0.38%、3.97%，說(shuō)明儀器設備精度優(yōu)良。

2.4.2 可重復性實(shí)驗

按“2.3.1”項下邊法紀得供樣品水溶液（S1)6份，按“2.1”項下色譜儀標準氣相測量。以16號峰毛蕊大豆異黃酮為參考峰，測算各一共有峰的相對性保存期和相對性峰總面積RSD<0.24%、4.35%，說(shuō)明方式可重復性?xún)?yōu)良。

2.4.3 可靠性實(shí)驗

按“2.3.1”項下邊法紀得供樣品水溶液（S1），按“2.1”項下色譜儀標準，各自在0、3、6、12、18、24 h氣相測量。以毛蕊大豆異黃酮為參考峰，測算各一共有峰的相對性保存期和相對性峰總面積RSD<0.24%、4.57%，說(shuō)明試品在24 h內平穩。

2.4.4 耐用度實(shí)驗

取同一批試品水溶液（S1），各自選擇同一離子交換柱Waters XBridge®Shield RP18(250 mm×4.6 mm,5μm）的不一樣生產(chǎn)批號氣相，生產(chǎn)批號各自為0135383132、0136392001、0137392827，按“2.1”項下色譜儀標準氣相測量。以毛蕊大豆異黃酮為參考峰，測算各一共有峰的相對性保存期和相對性峰總面積RSD<0.39%、6.94%。